论文摘要
目的：在前期的研究基础上,探讨MicroR-33对黑色素瘤细胞株增殖和凋亡的影响。方法：构建靶向MicroR-33的高表达mimics及inhibitor干扰单链,运用脂质体转染技术将其导入黑色素瘤高转移细胞B16F10中,使MicroR-33基因高表达或表达抑制,用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）验证MicroR-33基因的差异表达。用MTT法检测各组B16F10细胞的细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,最后统计分析MicroR-33对B16F10黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果：1.MicroR-33 mimics及inhibitor转染后,转染细胞内可见cy3荧光物质,提示转染成功。2.Real-time PCR检测结果,MicroR-33 mimics组中MicroR-33基因相对表达量（1.7733E3±2.4583E2）明显高于空白组和mimics对照组（0.9340±0.2913）（t=12.487,P=0.006<0.05）；MicroR-33 inhibitor组中MicroR-33基因相对表达量（0.6973±0.1958）低于空白组和inhibitor对照组（1.0200±0.0848）,但未达到显著性差异；而mimics对照组,inhibitor对照组和空白组比较也无显著差异性（P>0.05）。3.转染48h后各组B16F10黑色素瘤细胞镜下显示MicroR-33 mimics组细胞密度较其他几组明显稀疏。MTT绘制细胞生长曲线发现,与空白组相比,MicroR-33 mimics组细胞生长呈下降趋势,且在转染后48h（1.1875±0.0502）（t=-14.5,P=0.044<0.05）及72h（1.7500±0.0933）（t=-13.59,P=0.047<0.05）,此趋势具有显著性差异。而MicroR-33 inhibitor组,mimics对照组和inhibitor对照组细胞生长趋势与空白组比较均无显著差异性（P>0.05）。4.流式细胞术检测细胞凋亡率结果,MicroR-33 mimics组B16F10黑色素瘤细胞凋亡率（1.8050±0.2050）%明显高于空白组（1.13±0.1414）%（t=15.000,P=0.042<0.05）；而mimics对照组（1.3650±0.0212）, MicroR-33 inhibitor组（1.4450±0.0212）%,inhibitor对照组（1.3700±0.2546）%细胞凋亡率与空白组比较均无显著差异性（P>0.05）。5.细胞周期结果显示MicroR-33 mimics组黑色素瘤细胞G1期细胞比例（62.7±1.7321）与空白组（53.5±1.9630）相比显著增加（t=4.98,P=0.016<0.05）,S期细胞比例（23.4±2.5044）与空白组（32.6±2.5566）相比显著减少（t=-4.998,P=0.004<0.05）,而G2期细胞比例无显著变化。MicroR-33 inhibitor组,mimics对照组,inhibitor对照组与空白组比较各周期细胞比例无明显变化（P>0.05）。结论：MicroR-33在高表达时能抑制B16F10黑色素瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡