论文摘要
目的 通过对柯萨奇病毒（CVB3）心肌炎细胞毒T细胞（CTL）亚类（ACTL、VCTL、MCTL） TCR CDR3 Vβ基因取用格局的分析,确定触发免疫反应性心肌损伤的特异性CTL细胞克隆,揭示疾病的发病机制,为阻断CTL与心肌细胞的结合最终达到防治病毒性心肌炎的目的提供先决条件。 方法 ①选体重25-30克,6-8周龄的雄性Balb/c鼠,每只腹腔内注射6×104PFU的CVB3,制作CVB3心肌炎动物模型,同体重、同周龄的雄性Balb/c鼠作为对照组;②无菌摘取取72小时内新生Balb/c鼠心脏,培养单层心肌细胞;③单层心肌细胞分为三组,分别用CVB3处理、放线菌素D处理和不经过任何处理;④无菌摘取CVB3心肌炎鼠肠系膜淋巴结及腹股沟淋巴结,制成单细胞悬液,分别将细胞悬液加入上述三组单层心肌细胞,采用免疫吸附法获取ACTL、VCTL、MCTL;⑤采用MTT法对ACTL、VCTL、MCTL和对照组T细胞进行细胞毒鉴定,分别计算OD值及细胞毒活性;⑥分别设计CTL的Vβ引物作为上游引物,Cβ引物作为下游引物;⑦常规进行RT-PCR,PCR反应产物琼脂糖凝胶上电泳,确认PCR反应产物,并据此判断TCR Vβ基因的取用格局。 结果 实验组ACTL、VCTL、MCTLOD值均值分别为0.42、0.43、0.43,而对照组T细胞OD值均值为0.82,实验组三类CTL间两两比较OD值差别无统计学意义（p均大于0.01）,而实验组三类CTL与对照组
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