论文摘要
本文旨在建立转基因稻米香125S/Bar68-1及其米制品外源重组DNA的PCR检测方法,并研究其外源重组DNA在米制品加工过程中的降解情况,为我国转基因水稻的检测、安全评估及在食品链中的溯源研究提供技术和理论支持。本研究主要包括以下三部分：实验一旨在建立一种简单、快速、有效的转基因稻米DNA提取方法,为后续建立转基因稻米的PCR检测方法奠定基础。实验以转基因糙米、非转基因糙米和转基因精米为材料,选择传统的CTAB法、改良碱处理法和高温水煮法提取各样品中的DNA,每个处理设置6个重复。由DNA提取物的检测结果得知：改良碱处理法提取的DNA的完整性、纯度和PCR反应三个方面与传统的CTAB法相近,且比CTAB法的产率高、耗时短、成本低。因此改良的碱处理法可以代替传统的CTAB法用于转基因稻米检测中DNA模板的制备。实验二旨在建立一种转基因稻米及其米制品的四重PCR检测方法,为食品链中转基因稻米及其米制品的快速检测提供技术和理论支持。实验以转Bar基因稻米SPS基因、CAMV35S启动子、Bar基因、NOS终止子为模板设计四对引物,通过引物浓度和退火温度的优化建立四重PCR检测方法为：反应体系12.5μL PCR Mix, CAMV35S、Bar、SPS和NOS引物添加量分别为0.5、0.2、1.0、0.5μL, 100ng DNA模板,加水至25μL；反应条件：预变性94℃5min；变性94℃1min,退火57℃1min,延伸72℃1min,40个循环；72℃延伸7min。结果表明：建立的四重PCR检测方法具有较好的特异性,可用于转基因稻米及其米制品的检测。实验三旨在研究转基因稻米外源重组DNA在米制品加工过程中的降解情况,为我国食品链中转基因稻米的检测及安全评估提供技术和理论支持。实验以转Bar基因精米为主要原料制作甜米酒和米果,选择CTAB法和改良碱处理法提取米制品中的DNA,并对SPS基因、CAMV35S启动子、Bar基因和NOS终止子进行不同大小片段的PCR扩增。结果表明：采用碱处理法提取的米制品DNA的纯度、质量浓度和PCR反应三个方面均优于CTAB法；在米酒发酵过程中,SPS基因在发酵第一天开始出现降解,CAMV35S启动子和NOS终止子在发酵第三天开始降解,而Bar基因在发酵四天里都没有降解,发酵结束后能够检测到的SPS, Bar, CAMV35S和NOS的最长片段分别为916,568,446和180bp；在米果加工过程中,煮制、干燥和微波导致了三种外源成分的初始降解,焙烤导致了进一步的降解,油炸导致的降解最严重,油炸处理后的米果中可以检测到的最大SPS基因和CAMV35S启动子的片段为168bp和446bp,而Bar基因和NOS终止子在本研究的引物条件下没有被检测到。由此可知,碱处理法能够快速、有效的提取转基因稻米制品中DNA,转基因稻米中的各种外源成分在不同加工条件下的稳定性不同。