不同抗癫痫药物对体外培养海马神经元存活率及其BDNF和p-CREB表达的影响

论文摘要

目的观察不同剂量PB、VAP和LTG对体外培养海马神经元存活影响及细胞内BDNF、p-CREB的表达变化,探索不同抗癫痫药物所致脑损伤的机制。方法取培养8天的成熟海马神经元,分为LTG组,PB组,VAP组和正常对照组（0.1% DMSO）。根据药物剂量,各组又分为高剂量组,中剂量组和低剂量组,分别为使用LTG12mg/L、8mg/L和4mg/L,PB26mg/L、13mg/L和6.5mg/L,VAP27mg/L、18mg/L和9mg/L。分别在加药后1天、4天、7天用MTT法检测细胞存活数量,免疫组化检测神经细胞BDNF和PCREB的表达变化。结果（1）加药1d后,PB高剂量组神经元的神经网络连接稀疏,细胞立体感差,光晕稍模糊,其余各药物组变化不明显。（2）加药4d后,高、中剂量PB组细胞均出现退行性变化,轴突变细,培养板背景清晰度差,见部分细胞碎片,同时,加入不同剂量VAP的各组细胞也出现退行性变化,神经网络稀疏,光晕模糊,细胞折光性差,轴突变细,尤以VAP高剂量组变化明显,培养细胞胞体内出现明显气泡,背景见细胞碎片。加入不同剂量LTG的各组细胞也开始出现退化变性,胞内出现少量空泡,光晕模糊,轴突变细,且神经网络明显稀疏,以LTG中、高剂量组细胞变化尤其明显。（3）加药后7天,PB高剂量组神经元的神经网络连接稀疏更明显,在400倍光镜下观察发现,细胞胞体内出现气泡,轴突连续性差,胞体表面光滑性差。VAP高剂量组神经元在400倍光镜下可观察到胞体中出现气泡,PB低、中剂量组,VAP中、低剂量组和LTG各组细胞情况同加药后4天。（4）加药后1天,高剂量PB组存活率显著低于正常对照组（P<0.01）;而低、中剂量PB处理组,以及不同剂量LTG处理组和不同剂量VAP处理组的细胞存活率与正常对照组比较无明显差异（P>0.05）。（5）加药后4天,除PB高剂量组外,PB中剂量组的海马神经元增殖率也显著低于对照组（P <0.05）,且两组海马神经元增殖率也都显著低于PB低剂量组（P<0.05）;不同浓度LTG处理组,VAP处理组存活率显著下降（P<0.05）,而不同剂量组之间存活率没有差异（P>0.05）。（6）药物维持作用7天,与对照组比较,各种药物不同剂量对神经元存活率无明显差异（P>0.05）。（7）在不同时间,对同种药物同剂量组进行比较,不同剂量LTG组,中、低剂量PB组,高剂量VAP组细胞存活率随时间改变而下降（P<0.05）。（8）加药后1d,高剂量PB组神经细胞的p-CREB和BDNF表达显著低于对照组和中、低剂量组（P<0.05）。（9）加药4天,中、高剂量PB组细胞的BDNF和p-CREB表达都低于正常对照组（P <0.01）和低剂量PB组（P<0.05）;高浓度VAP组细胞的BDNF的表达低于对照组,低、中剂量组（P<0.05）,p-CREB的表达低于对照组,低、中剂量组（P<0.01）;与对照组和中剂量组比较,BDNF的表达显著降低（P<0.01）,同时也低于低剂量组（P<0.05）,与对照组比较,高剂量LTG组细胞的p-CREB表达显著降低（P<0.05）,同时也低于中、低剂量LTG组（P< 0.05）,。（10）加药7天,各药物各浓度组BDNF和p-CREB的表达与对照组比较均无差异（P>0.05）。（11）不同时间,同种药物同剂量比较,中、高剂量PB组,高剂量VAP组和低、中、高剂量LTG组BDNF和p-CREB的表达下降。结论（1）本试验所用的三种抗癫痫药物,除PB外,LTG、VAP均可造成体外培养的海马神经元死亡。（2）AEDs所致的神经元损伤与剂量存在相关性,尤以高剂量PB的损害最明显,可造成体外培养的海马神经元急性死亡,造成神经元BDNF和p-CREB的表达迅速显著下降。（3）药物持续作用后,不同剂量的丙戊酸、拉莫三嗪均可造成海马神经元死亡,影响神经元BDNF和p-CREB表达的改变,考虑与药物蓄积造成培养环境改变有关。（4）VAP、LTG的体外试验与临床观察存在差异,值得进一步研究差异出现的具体机制。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文