假丝酵母产脂肪酶固定化研究

论文摘要

脂肪酶目前是世界第三大工业酶,由于酶的来源不同,其最适载体和最佳固定化方法都有其特异性。优良载体的选择和理想的固定化方法始终是国内外研究的热点。在本实验从一株高产脂肪酶的假丝酵母菌种出发,首先对发酵条件做了调整,提高了发酵时的通气量,使脂肪酶产量提高了约10%,发酵液的品质也得到了很大的提高,有利于下游分离纯化的操作。分离纯化过程中经过反复实践,得出了一种很好的方法,即将发酶液直接经大孔树脂和DEAE-琼脂糖离子交换树脂两步层析,酶活收率可达86.5%。而且,操作简单、操作周期短、成本低。分别以壳聚糖和氨基化后的硅胶作为固定化载体,用戊二醛作为交联剂,将脂肪酶共价固定化于载体上,壳聚糖的最佳固定化条件是戊二醛浓度2.5%,给酶量为4125U/g；氨基化硅胶的最佳固定化条件为戊二醛浓度2%,最佳给酶量在3456U/g,固定化酶活为2952U/g,最佳酶活表现率为85%。两种方法所得的固定化酶的耐温性和储藏稳定性都有了显著提高,可耐50℃高湿1小时（加游离酶数据）,氨基化硅胶固定化酶在50℃下保温3小时后仍保留有14%的酶活。（两载体的比较数据）结果显示假丝酵母产脂肪酶固定于弱亲水性载体上要比固定于强亲水性载体上效果更好。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 脂肪酶简介
• 1.1.1 脂肪酶的结构
• 1.1.2 脂肪酶的催化特性
• 1.1.3 影响酶催化活性的因素
• 1.1.4 脂肪酶的应用
• 1.2 脂肪酶的固定化研究进展
• 1.2.1 吸附法
• 1.2.2 共价交联法
• 1.2.3 交联法
• 1.2.4 包埋法
• 2中的固定化'>1.2.5 超临界CO₂中的固定化
• 1.3 壳聚糖的结构及其应用
• 1.3.1 壳聚糖的结构
• 1.3.2 壳聚糖的化学性质
• 1.3.3 壳聚糖的应用
• 1.4 硅胶材料的性质及其应用
• 1.4.1 硅胶材料简介
• 1.4.2 硅胶的结构
• 1.4.3 硅胶的种类
• 1.4.4 硅胶的应用
• 1.5 论文研究的意义
• 第二章 假丝酵母产脂肪酶的发酵
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 斜面和种子培养基
• 2.2 方法
• 2.2.1 培养方法
• 2.2.2 脂肪酶的测定方法
• 2.2.3 吐温加量对产酶及发酵液澄清度的影响
• 2.2.4 橄榄油加量对产酶及发酵液澄清度的的影响
• 2.2.5 最优发酵条件正交实验
• 2.2.6 摇瓶型号对发酵液澄清度和酶活的影响
• 2.2.7 菌体干重、发酵液残糖含量及酶活随时间变化曲线
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 吐温加量对产酶及发酵液澄清度的影响
• 2.3.2 橄榄油加量对产酶及发酵液澄清度的影响
• 2.3.3 最优发酵条件正交实验
• 2.3.4 摇瓶大小对发酵液浊度和酶活的影响
• 2.3.5 菌体干重、发酵液残糖含量及酶活随时间变化曲线
• 2.4 本章小结
• 第三章 假丝酵母产脂肪酶的分离纯化
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 实验方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 盐析与透析
• 3.2.2 层析结果
• 3.2.3 SDS-PAGE结果与分析
• 3.4 本章小结
• 第四章 假丝酵母产脂肪酶的固定化
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 对硝基苯酚标准曲线
• 4.3.2 固定化过程中戊二醛浓度和加酶量对两种固定化酶最终活性的影响
• 4.3.3 两种固定化酶的最适反应温度和不同温度下的稳定性
• 4.3.4 pH对固定化酶稳定性的影响
• 4.4 本章小结
• 总结与建议
• 一 总结
• 二 建议
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的学术论文目录