论文摘要
本研究用一段人工合成的CpG序列与猪圆环病毒PCVwhn株编码CAP蛋白的基因（ORF2）共同构建一种含CpG寡核苷酸的新型猪圆环病毒Ⅱ型基因疫苗（pcDNA-PCV-ORF2-CpG）。将5种猪细胞因子IL-2，IL-4，IL-6，IL-6/4，IFN-γ及含CpG寡核苷酸的真核表达质粒作为分子免疫佐剂，与本实验室保存的pcDNA-PCV-ORF2基因疫苗共同免疫仔猪，采用间接ELISA试验和流式细胞仪（FACS）分别对仔猪特异性抗PCV2抗体IgG和外周血T淋巴细胞亚类CD3+、CD4+、CD8+的动态变化进行检测。以本试验室申请的大规模提取质粒的专利方法进行基因疫苗和分子佐剂的制备，并以壳聚糖进行包裹。将基因疫苗pcDNA-PCV-ORF2和6种分子佐剂pcDNA-PCV-ORF2-CpG，IL-2，IL-4，IL-6，IL-6/4，IFN-γ，按照1:1的比例以250μg和500μg两种剂量肌注免疫仔猪，检测仔猪的外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数和仔猪血清中特异性PCV2血清抗体IgG动态变化。结果表明，pcDNA-PCV2-ORF2基因疫苗免疫仔猪后，特异性抗体和T淋巴细胞数显著升高，与对照组差异显著（P＜0.05）。pcDNA-PCV-ORF2-CpG组免疫仔猪后，外周血T淋巴细胞有明显的反应性，CD3+T淋巴细胞数实验组高于对照组，差异极显著（P＜0.01）或显著（P＜0.05）。但是各佐剂试验组之间差异不显著（P＞0.05）。pcDNA-PCV-ORF2-CpG基因疫苗免疫仔猪后诱导仔猪产生了PCV2特异性抗体，与空载体及空白对照组相比，差异极显著（P＜0.01）；各佐剂试验组之间差异不显著（P＞0.05）。pcDNA-PCV-ORF2-CpG抗体水平高于pcDNA-PCV2-ORF2组，且持续时间长，大剂量组优于小剂量组。猪细胞因子佐剂组免疫仔猪后，细胞和体液水平都高于未加佐剂组和对照组，差异极显著（P＜0.01）或显著（P＜0.05）。细胞免疫方面IL-2，IFN-γ佐剂组的抗体水平要明显高于其他佐剂组，差异显著（P＜0.05），IL-2和IFN-γ佐剂组的CD3+T淋巴细胞数在免疫仔猪后第35d达到最高。而IL-4，IL-6，IL-6/4佐剂组在体液免疫方面表现出明显的佐剂效应，与空载体组和对照组差异显著（P＜0.05）。其中IL-6佐剂组的抗体水平升高快，持续的时间长（90d）。pcDNA-PCV2-ORF2基因疫苗和猪细胞因子共同免疫仔猪后诱导仔猪产生了良好的体液和细胞免疫应答。结果表明PCV2 DNA疫苗与以上佐剂的配合均能够诱导仔猪产生良好的体液和细胞免疫应答，以CpG和IL-6的免疫增强作用最佳，IL-6/4，IL-2，IL-4和IFN-γ次之，并且呈剂量相关性。本研究应用猪圆环病毒DNA疫苗和CpG及5种细胞因子为佐剂，以壳聚糖纳米载体包裹后，按不同剂量肌肉免疫仔猪，探讨了其体液和细胞免疫应答，旨在为PCV2基因疫苗的临床应用提供科学依据。应用CpG和5种细胞因子对PCV2的佐剂效应研究在国内外尚属首次报道。