论文摘要
目的: 利用分子生物学技术克隆大鼠睫状神经生长因子（CNTF）基因片段,构建腺相关病毒表达载体,为探讨CNTF 对大鼠视网膜神经节细胞的影响奠定基础。方法: 1.采用基因拼接的方法克隆大鼠CNTF 的ORF（开放读码框）DNA 片段,所得的DNA 片段经SalⅠ和XbaⅠ双酶切后定向插入腺相关病毒载体AAV-MCS质粒中构建成pAAV-CNTF。2.pAAV-CNTF 和另外两种质粒pHelper、pAAV-RC 通过脂质体共转染AAV-293 细胞,包装成带有CNTF 的重组腺相关病毒。收集病毒颗粒,同时以pAAV-LacZ 作为报告基因和pHelper、pAAV-RC 三种质粒在和pAAV-CNTF 完全相同的条件下共转染AAV-293 细胞,通过β—半乳糖苷酶染色测定转染率,收集病毒原液。以不同稀释梯度的病毒感染HT-1080 细胞,通过β—半乳糖苷酶染色测定病毒滴度。结果:1.测序证实CNTF 与GeneBank 提供的原始序列完全一致。酶切鉴定与PCR筛选证实重组质粒和预期结果完全一致。2.藉β—半乳糖苷酶原位染色法检测报告基因LacZ 在人纤维肉瘤细胞（HT-1080）中的表达测得重组病毒滴度为7.0×107个∕ml。结论: 本实验成功地克隆了CNTF 基因并构建了其腺相关病毒表达载体,为进一步研究用CNTF 基因转染的方法来促进视神经损伤修复奠定了基础。
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- [1].腺相关病毒载体:通往肿瘤基因治疗的桥梁[J]. 分子诊断与治疗杂志 2015(03)
- [2].携带NMU2R shRNA重组腺相关病毒载体的构建及其评价[J]. 生物学杂志 2019(03)
- [3].重组腺相关病毒载体在心血管疾病基因治疗中的应用(英文)[J]. 中南大学学报(医学版) 2011(02)
- [4].腺相关病毒载体在阿尔茨海默病中的应用[J]. 中国现代医生 2011(31)
- [5].重组腺相关病毒载体的免疫性研究及其解决策略[J]. 中国临床药理学与治疗学 2010(05)
- [6].化学修饰的重组腺相关病毒载体[J]. 病毒学报 2013(05)
- [7].抑制14-3-3ζ表达的siRNA及其重组腺相关病毒载体的构建[J]. 安徽农业科学 2011(23)
- [8].重组人血管内皮生长因子121的腺相关病毒载体构建及诱导体内血管生成的实验研究[J]. 实用医学杂志 2010(12)
- [9].表达分泌型脑源性神经营养因子的腺相关病毒载体的构建及其表达的检测[J]. 生物工程学报 2008(02)
- [10].腺相关病毒载体:有望应用于癌症基因治疗[J]. 黑龙江畜牧兽医 2010(13)
- [11].重组腺相关病毒载体在肺癌治疗中的应用[J]. 海峡药学 2009(03)
- [12].表达HBsAg特异性siRNA的重组腺相关病毒载体的构建[J]. 实用肝脏病杂志 2010(03)
- [13].重组腺相关病毒载体的研究进展[J]. 生物技术通报 2012(11)
- [14].携带CIP2A shRNA重组腺相关病毒载体的构建及其鉴定[J]. 西安交通大学学报(医学版) 2015(06)
- [15].携带小鼠HVEM的重组腺相关病毒载体的构建及鉴定[J]. 华中科技大学学报(医学版) 2010(02)
- [16].小鼠BTLA胞外段腺相关病毒载体的构建和表达[J]. 华中科技大学学报(医学版) 2010(02)
- [17].携带双调控自杀基因的重组腺相关病毒载体的构建及初步应用[J]. 长沙医学院学报 2008(02)
- [18].构建重组人SERCA2a基因9型腺相关病毒载体和病毒包装[J]. 新疆医科大学学报 2012(12)
- [19].携带NT4-AcSDKP融合基因重组腺相关病毒载体的构建[J]. 西安交通大学学报(医学版) 2012(06)
- [20].Rspo1-EGFP重组腺相关病毒载体的构建[J]. 现代食品科技 2009(09)
- [21].抑制miR-140腺相关病毒载体的构建及鉴定[J]. 广东医学 2016(07)
- [22].hTRX-PR39重组腺相关病毒载体的构建[J]. 山东大学学报(医学版) 2011(07)
- [23].Dll4基因靶向RNAi重组腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备[J]. 军医进修学院学报 2009(03)
- [24].大鼠TNFR-Fc重组腺相关病毒载体的构建、表达及中和活性鉴定[J]. 免疫学杂志 2013(11)
- [25].8型腺相关病毒载体的特性及其在基因治疗中的应用[J]. 病毒学报 2011(01)
- [26].NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因重组腺相关病毒的构建及鉴定[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2008(08)
- [27].基因治疗用腺相关病毒载体的剂量效应与剂量控制(英文)[J]. 中国临床药理学与治疗学 2008(10)
- [28].携带人肿瘤抑素Tumstatin基因的重组腺相关病毒载体的构建及其在乳腺癌细胞中的表达研究[J]. 实用预防医学 2010(12)
- [29].大鼠CTLA4-FasL融合基因重组腺相关病毒载体的构建、制备及表达[J]. 免疫学杂志 2011(12)
- [30].携带人肿瘤抑素Tumstatin基因的重组腺相关病毒载体的构建及其在乳腺癌细胞中的表达研究[J]. 长沙医学院学报 2011(01)
标签：睫状神经营养因子论文; 分子克隆论文; 腺相关病毒载体论文;