环境致癌物苯并芘灭活PTEN的机制研究

论文摘要

研究表明,90%-95%的癌症与环境污染有关,只有5%-10%的病例是由基因缺陷所引起。例如,87%的肺癌都有吸烟的诱因,而近年出现的“癌症村”则是环境污染引起癌症的极端例子。多环芳烃是一种分布广泛的环境致癌物,可引起机体DNA损伤,但其诱发癌症的机理还远未阐明。本课题中以人的正常支气管上皮细胞作为研究对象,探索致癌性最强的多环芳烃类化合物苯并芘对其的影响,在此基础上阐述环境因素对肺癌的发生、发展的分子机理。我们发现,经过苯并芘处理的支气管上皮细胞在形态学上确实发生了明显改变,同时,细胞内的PI3K/AKT信号通路被激活。最值得注意的发现是,抑癌基因PTEN在蛋白水平上被下调,同时伴随着DNA甲基转移酶DNMT1在蛋白水平上上调,并且表现出明显的苯并芘剂量和时间依赖效应;进一步研究发现,PTEN基因在转录水平上也发生明显改变,而DNMT1在转录水平上并没有发生改变,提示这可能是由于PTEN基因的启动子富含GC岛区域受到DNMT1的作用,发生了甲基化作用,从而使之表达得到抑制;对于DNMT1上调原因,初步断定其与PI3K/AKT信号通路有关,但具体机制还有待探索。现在肺癌的分子靶向疗法越来越受到青睐,我们对环境因素的致肺癌机理研究,将为我们寻找新的临床靶向药物有着积极作用,为癌症预防及治疗提供新的策略,为我们的肺癌病人带来福音,给他们带来希望。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 第1章 绪论
• 1.1 肺癌简介
• 1.1.1 肺癌分类
• 1.1.2 肺癌临床治疗
• 1.1.3 肺癌发生原因探索
• 1.1.4 肺癌发生
• 1.1.5 肺癌的分子靶向疗法
• 1.2 多环芳烃（Polycyclic aromatic hydrocarbon, PAH）
• 1.2.1 基本性质
• 1.2.2 危害性
• 1.2.3 作用机制
• 1.2.4 Bap 为例说明作用机制
• 1.3 PTEN 简介
• 1.3.1 PTEN 简介
• 1.3.2 PTEN 基因结构
• 1.3.3 PTEN 基因功能研究进展
• 1.3.4 PTEN 与肺癌
• 第2章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 细胞系
• 2.1.2 主要实验试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 主要实验溶液配制方法
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.2.1 细胞培养
• 2.2.2.2 细胞传代
• 2.2.2.3 细胞冻存
• 2.2.2.4 提取细胞蛋白
• 2.2.2.5 考染
• 2.2.2.6 Western bltting
• 2.2.2.7 IP
• 2.2.2.8 MTT
• 2.2.2.9 提取RNA
• 2.2.2.10 反转cDNA
• 2.2.2.11 RT-PCR 体系
• 2.2.2.12 提取细胞核基因组DNA
• 2.2.2.13 MSP
• 第3章 实验结果与讨论
• 3.1 实验结果
• 3.1.1 BaP 对细胞形态的影响
• 3.1.2 BaP 对16-HBE 细胞增殖能力的影响
• 3.1.3 BaP 对PTEN、DNMT1 的影响
• 3.2 讨论
• 参考文献
• 特殊符号
• 致谢