百合查尔酮合成酶（CHS）基因对花色调控影响的研究

论文摘要

本研究从东方百合‘索邦’花瓣中分离了对花色调控起重要作用,花色素苷生化合成途径的早期关键基因-查尔酮合成酶（CHS）基因,进行生物信息学分析及功能验证,旨在为培育蓝色百合花提供理论依据和技术支持。取得的研究结果如下:1、克隆了东方百合‘索邦’CHS基因结合简并引物设计,使用RT-PCR （ Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）技术从东方百合‘索邦’花瓣获得查尔酮合成酶（CHS）基因cDNA序列,并提交Genbank,登录号为:GQ483376,暂命名为LCHS2。2、构建了的过量表达载体和RNA干扰载体构建了花特异启动子PCHS和组成型启动子CaMV35S（Cauliflower mosaic virus35S）驱动的东方百合‘索邦’LCHS2基因过量表达载体和RNA干扰载体。3、东方百合‘索邦’LCHS2基因的瞬时转化分析用真空渗透的方法瞬时转化矮牵牛离体叶片,检测了东方百合‘索邦’LCHS2基因mRNA水平的转录情况和GFP（Green fluorescence protein）基因、GUS（β-glucuronidase）基因的蛋白表达情况,为遗传转化提供前期的检测手段。4、使用VIGS体系转化矮牵牛使用基于VIGS体系的RNA干扰技术转化矮牵牛,与野生型相比,花朵的颜色发生了变化,花色表型出现了镶嵌型、马赛克型和中间型3种类别,并且花色素苷的含量也有所降低。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 问题的提出及国内外研究研究现状
• 1.2 百合概述
• 1.3 矮牵牛概述
• 1.4 CHS（Chalcone synthase）基因
• 1.5 RNA 干扰技术及原理
• 1.6 病毒诱导的基因沉默
• 1.7 查尔酮合成酶基因启动子
• 1.8 花色素苷生化合成途径
• 1.9 本研究的目的和意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 试验材料及试剂
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 菌株、质粒或载体
• 2.1.3 主要试剂及试剂盒
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 引物设计
• 2.2.2 载体选择
• 2.2.3 实验操作及步骤
• 第三章 研究结果
• 3.1 克隆了东方百合‘索邦’CHS 基因
• 3.1.1 东方百合‘索邦’花瓣总RNA 的提取与纯化
• 3.1.2 东方百合‘索邦’CHS 基因的PCR 扩增
• 3.2 东方百合‘索邦’LCHS2 基因生物信息学分析
• 3.3 建立了矮牵牛梦幻系列再生体系
• 3.3.1 矮牵牛茎段再生
• 3.3.2 矮牵牛愈伤再生
• 3.3.3 矮牵牛叶盘再生
• 3.4 矮牵牛不同外植体抗性浓度筛选
• 3.4.1 矮牵牛茎段抗性浓度筛选
• 3.4.2 矮牵牛愈伤抗性浓度筛选
• 3.4.3 矮牵牛叶盘抗性浓度筛选
• 3.5 载体构建
• 3.5.1 含35S 启动子的东方百合‘索邦’LCHS2 基因过量表达载体构建
• 3.5.2 含花特异启动子PCHS 的东方百合‘索邦’LCHS2 基因过量表达载体构建
• 3.5.3 含35S 启动子的东方百合‘索邦’LCHS2 基因的RNA 干扰载体构建
• 3.5.4 含花特异启动子PCHS 的东方百合‘索邦’LCHS2 基因干扰载体构建
• 3.5.5 病毒载体构建
• 3.6 获得了矮牵牛花色干扰表型植株
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介