论文摘要
脂联素是脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子，由Scherer等于1995年首先从鼠的脂肪细胞分离出来，1999年Arita等将其命名为脂联素。因为脂联素是一种脂肪细胞因子，所以开始的研究集中于其对肥胖和糖尿病的作用方面。研究显示脂联素血浆浓度决定于腹部脂肪含量，脂联素可能是联系腹型肥胖、胰岛素抵抗及致动脉粥样硬化血脂谱的内在因素。后来的人们发现脂联素水平与一些肿瘤具有相关性，临床流行病学研究资料发现，低脂联素水平可独立增加患子宫内膜癌、乳腺癌、胃癌和前列腺癌的危险性。由于脂联素水平与多种生殖系统肿瘤相关，所以我们设计体外实验来验证脂联素水平对卵巢癌细胞系ES-2的作用。本实验的目的是利用已克隆好的脂联素基因工程菌和球形结构域脂联素基因工程菌大量表达目的蛋白，研究最佳的蛋白纯化方法。并验证脂联素对卵巢癌细胞系ES-2的增殖、细胞周期以及迁移的抑制作用。通过对表达条件的摸索，找到一个蛋白大量表达的合适条件来大量扩增基因工程菌，对其表达的蛋白进行纯化。利用His标签与Ni+的特异亲和力使用His-Bind纯化柱对其进行纯化，由于全长脂联素蛋白的表达主要以可溶性蛋白形式存在，而球形结构域脂联素蛋白的表达主要以包含体形式存在，所以我们分别对其采用不同的方法进行纯化。对全长脂联素进行可溶性蛋白的直接过柱纯化，对球形结构域脂联素蛋白进行包含体变性后的亲和层析。本研究用人脂联素重组体进行卵巢癌细胞系ES-2的体外抑瘤实验。采用MTT（四唑盐比色试验）法测定蛋白对细胞增殖的抑制作用，划痕试验检验脂联素对细胞迁移的影响，用流式细胞仪检测其对细胞周期的抑制。通过实验条件的摸索，我们大量的表达了基因工程菌，并利用Ni+柱对其进行纯化得到了目的蛋白。得到的全长脂联素蛋白和球形结构域脂联素蛋白浓度分别为0.51mg／ml和0.77mg／ml。通过MTT（四唑盐比色试验）法测定，发现脂联素可以明显抑制卵巢癌细胞系ES-2的增殖，并且这种作用具有浓度依赖性，从而进一步证明了脂联素可以抑制卵巢癌细胞的恶性增殖。划痕试验证明，脂联素抑制卵巢癌细胞的迁移，并且与浓度大小成正比。证明脂联素可以降低卵巢癌细胞的运动能力，抑制肿瘤细胞迁移，从而抑制肿瘤细胞的转移。流式细胞仪检测结果表明脂联素可以将卵巢癌细胞分裂阻滞在G1期，抑制细胞分裂。