Toll样受体-2在结核感染巨噬细胞中的表达、功能及其与人结核易感性关系的初步研究

论文摘要

随着全世界结核感染人数的持续升高,结核的免疫机制近年来重新成为研究的热点。Toll样受体-2是巨噬细胞表面识别结核抗原、启动下游信号的关键蛋白。本课题分为两部分分别探讨Toll样受体-2在结核天然免疫机制中的重要作用:（1）Toll样受体-2在结核感染过程中的表达及相关功能。（2）Toll样受体-2基因多态性与中国人群易感相关性。第一部分卡介苗活菌与结核纯蛋白衍生物诱导人巨噬细胞Toll样受体-2表达及其相关功能的研究【目的】本实验研究Toll样受体-2配体卡介苗活菌（BCG）与结核纯蛋白衍生物（H37Rv-PPD）刺激下人单核-巨噬细胞膜表面Toll样受体-2蛋白表达调节与炎症因子、细胞凋亡的变化。【方法】分别用H37Rv-PPD和BCG刺激分化成熟的U937细胞,收集无干预、1小时、3小时、6小时、12小时、24小时细胞及上清。用流式细胞仪检测细胞表面Toll样受体-2表达情况,ELISA分别检测上清中TNF-α,IL-1β,IL-10浓度,流式细胞仪检测细胞annexin V蛋白以判定凋亡情况。【结果】BCG刺激分化成熟U937细胞后,表面Toll样受体-2表达量随时间逐渐升高,至3小时达高峰,后回落至基线;上清中TNF-α浓度也在3小时达到峰值,IL-1β浓度逐渐上升,IL-10浓度逐渐下降;细胞凋亡比例在24小时内逐渐增多。PPD刺激分化成熟U937细胞后,表面Toll样受体-2表达量24小时内持续升高;上清中TNF-α高峰推迟至12小时,IL-1β无明显变化,IL-10有升高趋势;细胞凋亡比例在24小时内无明显变化。【结论】（1）BCG和H37Rv-PPD均能引起巨噬细胞Toll样受体-2表达的上调和相应炎症相关蛋白的释放。相较于H37Rv-PPD,BCG可能还存在着更为复杂的反向调控作用,提示了Toll样受体-2是结核免疫进程中的重要机制。（2）高浓度BCG可以引起单核-巨噬细胞模型按时间推移逐渐凋亡,这种凋亡与Toll样受体-2及TNF-α的表达呈正相关,提示TLR-2可能介导了结核诱发的保护性巨噬细胞凋亡。（3）H37Rv-PPD虽然激活了Toll样受体-2信号却不能诱发细胞凋亡,提示高毒力菌株可以抑制凋亡,其原因可能在于细菌外分泌蛋白存在某种毒力因子。第二部分中国西南地区汉族人群Toll样受体-2基因Arg753Gln,Arg677Trp多态性与结核易感性关系【目的】研究中国西南地区汉族人群中Toll样受体-2基因Arg753Gln,Arg677Trp多态性与结核易感性关系,以探讨Toll样受体-2单个核苷酸突变对于结核免疫的影响。【方法】选取中国西南地区结核患者77名和健康对照75名,从全血中提取DNA,PCR仪扩增Toll样受体-2片断,AciI酶切以判定基因型,并测序验证。【结果】在入组的152人中,仅发现1例患者Arg753Gln为G/A杂合子,比例为0.6%,不构成多态性,同时未发现Arg677Trp突变者。【结论】（1）Toll样受体-2基因:Arg753Gln,Arg677Trp在中国西南地区人群中突变率较低,无法构成多态性。（2）Toll样受体-2基因位点Arg677Trp可能与结核易感性无关。（3）Toll样受体-2基因位点Arg753Gln多态性具有人种特异性,可能与白种人结核易感性有关,而在中国人结核发病中的价值较小。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 卡介苗活菌与结核纯蛋白衍生物诱导人巨噬细胞TLR-2表达及其相关功能的研究
• 一、材料与方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 参考文献
• 第二部分 中国西南地区汉族人群TLR-2基因Arg753Gln,Arg677Trp多态性与结核易感性关系
• 一、对象与方法
• 二、结果
• 三、讨论
• 引用文献
• 小结
• 综述
• 引用文献
• 后记