论文摘要
第一部分:低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达的影响为探讨甲状腺功能低下对大鼠脑组织中同源盒基因Nkxs表达的影响,我们复制了胚胎期和生后发育临界期碘缺乏致甲低的大鼠模型,取孕16天、新生及20日龄仔鼠为实验动物,(分别相当于人胚胎发育的早、中、晚期)利用荧光实时定量PCR技术检测正常及低碘仔鼠脑组织中Nkxs表达水平。发现随着年龄增长,Nkx-2.1表达水平迅速下降,各年龄段表达水平差别有统计学意义;各年龄组低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义,孕16天正常大鼠Nkx—2.1表达水平明显高于低碘大鼠,而新生及20日龄低碘大鼠却明显高于正常大鼠。正常大鼠Nkx-2.2在新生期表达水平最低;低碘大鼠随年龄增长表达水平迅速增高,各年龄组表达水平差别有统计学意义。Nkx-6.1在孕16天表达水平最高,低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义,新生期、20日龄低碘及正常大鼠表达水平差别有统计学意义;各年龄段正常大鼠表达水平差别有统计学意义;低碘大鼠在孕16天与新生、20日龄表达水平差别有统计学意义,而新生与20日龄之间表达差别无统计学意义。Nkx—6.2在孕16天及新生期表达水平都很低,20日龄表达水平明显高于前两组育期;孕16天、20日龄低碘与正常大鼠表达水平差别有统计学意义,新生期低碘与正常大鼠表达水平差别无统计学意义。结果表明:甲状腺激素与同源盒基因Nkx之间确实存在相关关系,其相关性在孕16天胎鼠中就已表现出来,而此时胎鼠的甲状腺组织尚未发育成熟,提示母鼠甲状腺激素对胎鼠发育的重要作用。第二部分:甲状腺激素对原代培养大鼠神经胶质细胞Nkxs表达水平的影响为了解THs对大鼠神经胶质细胞Nkxs基因表达的刺激作用,我们利用正常Wistar大鼠脑组织的原代神经胶质细胞为研究对象,加入一定剂量的THs(T3和T4),在给药后0、12、24、48和72小时分别收获细胞,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞中Nkxs各亚型mRNA水平,动态观察THs对Nkxs表达水平的影响。结果发现在0h、12h、24h10-8M T3对神经胶质细胞Nkx-2.1表达量无明显刺激作用,48h在T3刺激作用下Nkx-2.1表达量明显低于对照组,72h其表达量反馈性增高,明显高于对照组;在T4刺激作用下,Nkx—2.1表达量在12h、24h、48h都明显低于对照组,72h其表达量也反馈性增高。Nkx-2.2在T3刺激12h后,其表达量明显低于对照组,24h后,其表达量明显高于对照组,48h后其表达量逐渐下降,,72h后,其表达量又反馈性增高,与对照组比较差别有统计学意义;T4对于神经胶质细胞中Nkx-2.2表达的刺激作用在0h、12h、24h、72h与T3刺激作用相似,在48h对Nkx-2.2表达的下调作用比T3作用更明显。Nkx-6.1在12h、24h对于在T3、T4刺激作用下都有明显的下调作用,其表达量都明显低于对照组,48时在T3、T4刺激作用下,其表达量都反馈性增高,都明显高于对照组,T3的上调作用要高于T4作用,而72h T4刺激作用明显增高,其表达量明显高于对照组及T3作用组。Nkx-6.2在T3、T4刺激作用12h后其表达量高于对照组,24h、48h后其表达量逐渐下调,T3、T4刺激作用72h后,其表达量都明显高于对照组。结果表明:THs对于大鼠神经胶质细胞中Nkxs各亚型都有不同程度的刺激作用,但这种作用趋势不是很明显,可能与低激素血清作用时间过短以及细胞收获时间点的选择有关。此外T4不仅仅是一种激素原,其刺激作用有时也明显高于T3刺激作用。第三部分:低碘膳食对大鼠脑组织细胞凋亡的影响为了解正常和碘缺乏大鼠脑组织细胞凋亡是否存在差异,我们利用已经复制好的低碘及正常大鼠脑组织制作冰冻切片,采用原位细胞凋亡检测试剂盒(Tunnel试剂盒)检测新生期低碘及正常大鼠脑组织细胞凋亡情况。结果发现,新生期低碘与正常大鼠脑组织细胞凋亡差别有统计学意义,推测低碘导致的脑发育迟滞与其引起的细胞凋亡增加有关,最终导致脑组织不可逆性损伤。
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