茯苓单孢菌株主要生物学特性的初步研究

论文摘要

茯苓Wolfiporia cocos一般腐生或寄生在松科植物赤松和马尾松根部,其地下形成的菌核具有极高的药用、食用和保健作用。茯苓的研究基础薄弱,茯苓性模式及生活史过程目前仍无定论。菌核形成于同核菌丝体还是异核菌丝体、茯苓单孢菌株是否能形成菌核,都缺少系统研究。本研究对茯苓的主要生物学特性开展了一系列研究,旨在为茯苓的育种奠定基础。具体研究内容与结果如下：（1）以菌株W的80个单孢菌株,菌株L的18个单孢菌株为材料,对其中菌株W的单孢菌株菌落形态和生长速度进行了测定,对菌株L的单孢菌株只测定生长速度。结果表明,菌株W的单孢菌株在菌落形态、气生菌丝浓密程度等方面差异明显。根据气生菌丝体的浓密程度、菌丝体形态等,可将菌株W的80个单孢菌株菌落表型分为两类,一类是气生菌丝较少的匍匐型,另一类是气生菌丝浓密的气生型。单孢菌株在完全培养基（CYM）中的生长速度介于2.62-3.23cm/d之间,个别菌株之间的生长速度差异极显著；在松木屑培养基中的生长速度介于0.82-1.52cm/d之间,不同菌株的生长速度差异不显著；相关性分析结果表明,这些单孢菌株在CYM培养基和松木屑培养基中的生长速度不存在相关性。菌株L的单孢菌株在CYM培养基中生长速度介于1.72-2.27cm/d之间,个别菌株之间的生长速度差异极显著。（2）以菌株W的单孢菌株为材料,进行了单孢菌株的配对试验。结果表明,在供试的280对配对组合中,217个配对组合在交接处气生菌丝体无明显反应,表现为可融洽生长,所占比例为77.5%；63个配对组合在交接处气生菌丝体非常浓密,形成明显的隆起型菌丝带,或者在交接处无菌丝体,形成明显的沟壑型隔离带,所占比例为22.5%。无论是隆起型还是沟壑型反应,均会在交接处产生褐色色素。挑取可融洽生长的单孢配对组合交接处菌丝体,进一步与两亲本单孢菌株及W菌株进行拮抗试验和ISSR鉴定,结果表明,引物P36、P38在杂交子10×14、45×25与6×15的ISSR扩增图谱中,不仅包含单孢菌株共有的DNA条带,也包含亲本单孢菌株各自的特异性DNA条带,拮抗试验与ISSR分析鉴定了这些菌株为杂交子。（3）以菌株W的68个单孢菌株、菌株L的18个单孢菌株为材料进行了松木栽培试验。结果表明,在菌株W的68个单孢菌株中,有10个菌株可以产生菌核,所占比例为14.6%；有36个菌株在松木段上发菌很好,但不能形成菌核,其余22个菌株的菌丝体不能在松木段上生长。对其中17个能在松木段上发菌良好,但不能形成菌核的单孢菌株,采用新鲜菌核进行诱引栽培。结果表明,有9个单孢菌株经诱引后可以形成菌核。菌株L的18个单孢菌株栽培试验结果表明,没有单孢菌株可以自发形成菌核,对其中9个能在松木段上生长的菌株用新鲜菌核进行诱引栽培,有2个单孢菌株经诱引以后可以形成菌核,其余9个单孢菌株菌丝体不能在松木段上生长。以上研究结果说明,茯苓部分单孢菌株具有结苓的能力,对于不能结苓的单孢菌株还可尝试采用以新鲜菌核作为诱引,诱使其形成菌核。这些能结苓单孢菌株、不能结苓单孢菌株、以及经诱引后可以结苓单孢菌株的遗传差异还有待于进一步开展系统深入的研究。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语表
• 1 前言
• 1.1 茯苓概述
• 1.1.1 茯苓的分类地位及资源分布
• 1.1.2 茯苓的生态习性
• 1.1.3 茯苓栽培历史概况
• 1.1.4 现代茯苓栽培方法
• 1.1.5 茯苓主要药用成分及药用功效
• 1.2 交配型系统在食用菌遗传育种中的应用
• 1.2.1 初级同宗结合
• 1.2.2 次级同宗结合
• 1.2.3 二极性异宗结合
• 1.2.4 四极性异宗结合
• 1.3 茯苓有性生殖及育种技术
• 1.3.1 茯苓的有性生殖
• 1.3.2 茯苓育种进展
• 1.4 体细胞不亲和性与分子标记在食用菌遗传分析中的应用
• 1.4.1 体细胞不亲和性
• 1.4.2 分子标记在遗传分析中的应用
• 1.5 研究目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 供试培养基
• 2.1.3 供试试剂
• 2.1.4 供试引物
• 2.1.5 主要仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 单孢菌株菌落形态观察
• 2.2.2 单孢菌株生长速度的测定
• 2.2.3 栽培试验
• 2.2.4 单孢菌株配对试验
• 2.2.5 杂交子的鉴定
• 3 结果与分析
• 3.1 单孢菌株菌落形态
• 3.2 单孢菌株生长速度
• 3.2.1 单孢菌株在CYM培养基中的生长速度
• 3.2.2 单孢菌株在木屑培养基中的生长速度
• 3.3 单孢菌株结苓试验
• 3.4 单孢配对试验结果
• 3.5 杂交子的鉴定
• 3.5.1 杂交子的初步鉴定
• 3.5.2 杂交子的ISSR鉴定
• 4 讨论
• 4.1 关于茯苓单孢菌株菌落形态
• 4.2 关于茯苓单孢菌株的菌核形成能力
• 4.3 关于茯苓单孢菌株配对反应
• 4.4 关于茯苓单孢菌株间的杂交
• 参考文献
• 致谢
• 附录