特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽的差异表达

论文摘要

两栖类皮肤抗菌肽因具有广谱抗微生物、抗肿瘤等活性和低免疫原性,以及独特抗菌作用机制,作为新一代抗生素药物候选分子的新来源而成为当今国际上生命科学领域中主流研究的热点之一。本研究以两栖类代表物种东北林蛙（Rana dybowskii）为材料,以大肠杆菌（Escherichia coli）和金色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）为特异刺激原,分别注射至林蛙背部淋巴囊特定时间后,取其皮肤甲醇抽提物,经SephadexG-50、反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化皮肤活性肽,比较E.coli和S.aureus胁迫下林蛙皮肤活性肽表达谱有无差异,通过体外抑菌试验,观察E.coli和S.aureus胁迫下皮肤活性肽组分对E.coli和S.aureus的抗菌效果,分析其皮肤活性肽差异性表达的规律;为后续有针对性筛选抗菌活性肽,深入探讨作为先大免疫系统的重要效应因子（活性肽）在生物进化过程中的作用及规律,提供新思路。结果显示,特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽组分的抑菌活性均呈增强趋势,日不同细菌胁迫下HPLC活性肽谱显示其表达量的差异,其中洗脱峰2、3、4、8、11和13对G-菌有抑制作用,而洗脱峰3、4、5、6和9对G+菌有抑制作用;并在一定时间内,各主要多肽洗脱峰随细菌胁迫时间呈上调表达,抑菌活性也呈增强趋势。提示,不同细菌胁迫下东北林蛙皮肤选择性表达特定抗菌肽组分,在多肽组合和表达量上提高了机体对特定微生物胁迫下的抗菌活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语表
• 1 绪论
• 1.1 生物活性肽抗菌研究进展
• 1.1.1 抗菌肽的发现及分布
• 1.1.2 抗菌肽的理化性质、结构特征及其生物学功能
• 1.1.3 抗菌肽的抗菌机制
• 1.1.4 抗菌肽的应用
• 1.2 两栖类皮肤活性肽抗菌研究
• 1.2.1 两栖类皮肤活性肽的组织学分布
• 1.2.2 两栖类皮肤活性肽的特性
• 1.2.3 两栖类皮肤活性肽的种类、功能及其哺乳类对应物
• 1.2.4 两栖类皮肤活性肽的研究现状
• 1.3 HPLC 分离多肽原理及实验依据
• 1.4 本研究立题依据及预期目标
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 试剂及材料
• 2.1.3 仪器
• 2.1.4 试剂配制及处理
• 2.2 细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽的制备
• 2.3 东北林蛙皮肤活性肽的 Sephadex 纯化
• 2.4 特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽 HPLC 图谱差异
• 2.4.1 HPLC 样品前处理
• 2.4.2 色谱条件的确定
• 2.4.3 测定方法
• 2.4.4 重现性试验
• 2.4.5 比较各实验组间东北林蛙皮肤活性肽液相图谱差异
• 2.5 特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽抑菌差异
• 2.6 数据处理方法
• 3 结果
• 3.1 东北林蛙皮肤活性肽的 Sephadex 纯化
• 3.2 特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽 HPLC 图谱的差异
• 3.3 特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽抑菌差异
• 4 讨论与分析
• 4.1 试验菌株选取原则
• 4.2 特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽 HPLC 图谱改变
• 4.3 特定细菌胁迫下东北林蛙皮肤活性肽抑菌活性改变
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢