羟基磷灰石纳米颗粒介导的体外转染及其保存方式的研究

论文摘要

目的:研究羟基磷灰石纳米颗粒结合DNA,体外转染细胞的能力。并分析作为基因载体的羟基磷灰石纳米颗粒胶体液的保存方式。方法:向羟基磷灰石纳米颗粒胶体液中加入一定浓度的CaCl2溶液,以提供二价阳离子Ca2+,修饰羟基磷灰石纳米颗粒;测定修饰后的羟基磷灰石纳米颗粒在不同pH值条件下的Zeta电位;用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析修饰后的羟基磷灰石纳米颗粒携带、保护DNA的能力,及与结合的DNA解离的方式;通过荧光显微镜的观察,计算羟基磷灰石纳米颗粒携带pEGFP-N3质粒,体外转染Bel7402细胞的转染率。将不同温度环境（-20℃、4℃及室温）保存下的羟基磷灰石用Ca2+修饰,通过琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜,测定不同保存条件下的羟基磷灰石携带DNA的能力,体外转染Bel7402细胞的转染率。结果:经过Ca2+修饰的羟基磷灰石纳米颗粒在酸性、碱性环境下Zeta电位均为正值,并可有效结合DNA;结合到羟基磷灰石纳米颗粒上的DNA可以用磷酸缓冲液洗脱下来;经过Ca2+修饰的羟基磷灰石纳米颗粒的转染效果明显好于没有修饰的羟基磷灰石纳米颗粒。羟基磷灰石纳米颗粒胶体液经-20℃冰冻保存后,不能通过Ca2+的修饰结合DNA,亦不能进行转染。而未冰冻（4℃及室温）保存的羟基磷灰石纳米颗粒经Ca2+修饰后有结合DNA的能力,并可体外转染细胞。结论:经过Ca2+修饰的羟基磷灰石纳米颗粒可以作为基因转导的载体。作为基因载体的羟基磷灰石纳米颗粒不能冰冻保存。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 pEGFP-N3质粒的转化、抽提及鉴定
• 2.2.2 HA胶体液的制备与检测
• 2.2.3 HA纳米颗粒结合DNA,体外转染细胞的能力
• 2.2.4 HA纳米颗粒保存方式的研究
• 第三章 结果
• 3.1 pEGFP-N3质粒的转化、抽提及鉴定
• 3.2 HA胶体液的制备与检测
• 3.3 HA纳米颗粒结合DNA,体外转染细胞的能力
• 3.4 HA纳米颗粒保存方式的研究
• 第四章 讨论
• 4.1 pEGFP-N3质粒的转化、抽提及鉴定
• 4.2 HA胶体液的制备与检测
• 4.3 HA纳米颗粒结合DNA,体外转染细胞的能力
• 4.4 HA纳米颗粒保存方式的研究
• 第五章 结论
• 第六章 参考文献
• 第七章 综述
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果及获奖情况