论文摘要
目的：通过构建慢病毒介导的HIF-1αshRNA载体,特异性地下调大鼠脑内HIF-1α的表达水平,观察HIF-1α在慢性脑低灌注状态下对认知功能的影响。方法：构建三种HIF-1αshRNA载体,使用慢病毒对其进行包装,测定病毒滴度。利用大鼠胶质瘤细胞筛选有效的干扰序列。随机将大鼠分为假手术+脑定位注射生理盐水组（sham组）、双侧颈总动脉结扎手术+脑定位注射生理盐水组（2VO组）、双侧颈总动脉结扎手术+脑定位注射慢病毒介导空载体组（2VO+RNAi negative组）、双侧颈总动脉结扎手术+脑定位注射慢病毒介导HIF-1αshRNA组（2VO+RNAi组）。采用物体识别试验、Morris水迷宫、荧光实时定量PCR、western-blot等方法分别检测大鼠的认知功能、HIF-1α基因及蛋白表达水平及认知相关分子CREB、 p-CREB、PSD95、MAP-2、SYN的蛋白表达水平。结果：与sham组大鼠相比,2VO组大鼠对新物体的识别能力下降,水迷宫实验逃避潜伏期延长。荧光实时定量PCR实验提示2VO+RNAi组较2VO+RNAi negative组海马区HIF-1α基因表达水平下调约40%；Western blot结果提示2VO术后的大鼠HIF-1α的表达增加,给予特异性RNAi干预后,2VO+RNAi组较2VO+RNAi negative组大鼠HIF-1α、CREB、p-CREB、MAP-2的蛋白表达水平下降,PSD95、突触素的蛋白表达水平无统计学差异。结论：慢性脑低灌注会引起大鼠认知功能损伤,应用RNAi技术对大鼠脑区特异性进行HIF-1α的下调,大鼠的认知功能进一步恶化。HIF-1α可能参与了慢性脑低灌注过程中对认知功能的调控过程。