蜘蛛香环烯醚萜对肠易激综合征的治疗作用及机理探讨

论文摘要

肠易激综合征（irritable bowel syndrome,IBS）是一种胃肠功能紊乱性疾病,以腹痛或腹部不适,伴有大便性状改变和排便习惯改变为特征。根据临床症状,可分为腹泻型、便秘型和腹泻便秘交替型。流行病学调查显示,在健康人群中该病的患病率高达10%～20%,占到消化科就诊人数的50%以上。其病理生理学基础主要是胃肠动力学异常和内脏敏感性增高,但其具体机制尚不明确。中医将肠易激综合征归于“肠郁”的范畴,认为其病机多为肝郁脾虚,气血不和所致,治疗多用疏肝解郁,健脾化湿为主。蜘蛛香是一种常用的苗药,可理气止痛、消炎止泻、祛风除湿。用于脘腹胀痛,消化不良,腹泻,痢疾,风湿痹痛,腰膝酸软等。通过前期研究证实了蜘蛛香应用于治疗IBS有显著疗效,蜘蛛香原粉对慢性应激所致IBS大鼠模型的胃肠功能及精神神经活动的异常均具有改善作用。经过筛选环烯醚萜对小鼠胃肠运动亢进和精神神经活动异常作用最强,故确定有效部位是环烯醚萜。课题通过观察蜘蛛香环烯醚萜对正常及IBS模型动物的胃肠道功能、精神活动的影响,以及蜘蛛香环烯醚萜干预下IBS大鼠结肠、血清、中枢5-HT含量,结肠5-HTR3A受体的mRNA和色氨酸羟化酶（TPH1）的mRNA表达,结肠和血浆中SP和VIP含量以及结肠中肥大细胞分布,探讨蜘蛛香环烯醚萜对腹泻型IBS的治疗作用及其作用机理,为临床治疗IBS提供实验依据。1蜘蛛香环烯醚萜对胃肠功能的作用目的:探讨蜘蛛香环烯醚萜对胃肠功能的影响1.1蜘蛛香环烯醚萜对正常小鼠胃肠功能的作用方法:正常小鼠灌胃给予蜘蛛香环烯醚萜71.2mg/kg、35.6mg/kg、17.8mg/kg、8.9mg/kg与空白组和越鞠保和丸组对照,给药4日后测定动物的胃排空率和小肠推进率。结果:蜘蛛香环烯醚萜35.6mg/kg、17.8mg/kg组能减缓胃排空和小肠推作用（P<0.05）,说明蜘蛛香环烯醚萜对正常小鼠胃肠功能有一定的抑制作用。1.2蜘蛛香环烯醚萜对利血平化小鼠胃肠功能的作用方法:小鼠每日腹腔注射利血平造模,同时灌胃给予蜘蛛香环烯醚萜71.2mg/kg、35.6mg/kg、17.8mg/kg、8.9mg/kg与空白组、模型组和越鞠保和丸组对照,给药6日后测定动物的胃排空率和小肠推进率。结果:腹腔注射利血平后,与正常组比较,模型组小肠推进率增高（P<0.05）。与模型组相比,蜘蛛香环烯醚萜71.2mg/kg组可减缓胃排空（P<0.05）,小肠推进没有明显差异。蜘蛛香环烯醚萜35.6mg/kg组可减缓胃排空和小肠推进（P<0.05）;蜘蛛香环烯醚萜17.8mg/kg组可减缓小肠推进（P<0.05）,胃排空没有明显差异。说明蜘蛛香环烯醚萜可改善利血平导致的胃肠运动亢进。1.3蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激所致IBS大鼠胃肠功能的作用方法:动物随机分为对照组、模型组、昂丹司琼组、氟西汀组、蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg、6.23mg/kg组。进行慢性应激实验:对照组14-15只/笼,不给任何刺激,其余各组每笼一只孤养,并加以慢性不可预见性的刺激,造模28天,造模期间同时给药。检测各组动物腹部回撤反射压力阈值和2h内排便粒数。结果:造模后,模型组动物疼痛压力阈值与最大耐受压力阈值均明显降低（P<0.01）,表明动物内脏敏感性增高,同时动物排便量明显增多（P<0.01）。蜘蛛香环烯醚萜各给药组动物与模型组比较,疼痛压力阈值与最大耐受压力阈值均增加,其中蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg组和12.46mg/kg组作用极显著（P<0.001）。蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg组动物排便粒数显著减少,与模型组相比有显著差异（P<0.05）。表明蜘蛛香环烯醚萜可改善应激所致IBS大鼠模型的胃肠功能,降低内脏敏感性,减少排便数。结论:IBS是一种胃肠紊乱性疾病,临床表现为腹痛、腹泻或者便秘等消化道症状,症状持续存在或间歇发作。蜘蛛香环烯醚萜可以减缓正常小鼠的胃肠运动和利血平化小鼠的胃肠功能亢进,降低慢性应激所致IBS模型大鼠的内脏敏感性,显著减少了IBS模型大鼠的排便数量,从而改善腹泻型IBS的临床症状。2蜘蛛香环烯醚萜对神经系统功能的影响目的:探讨蜘蛛香环烯醚萜对精神活动的影响2.1蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激所致IBS大鼠精神活动的影响方法:动物随机分为对照组、模型组、昂丹司琼组、氟西汀组、蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg、6.23mg/kg组,除对照组外,其余各组进行慢性应激实验。检测各组动物敞箱试验得分和糖水偏嗜度。结果:蜘蛛香环烯醚萜各给药组动物与模型组相比,敞箱试验水平运动得分与垂直运动得分增加,蔗糖偏嗜度提高。2.2蜘蛛香环烯醚萜对醋酸所致小鼠疼痛的影响方法:小鼠随机分为对照组、蜘蛛香环烯醚萜71.2mg/kg、35.6mg/kg、17.8mg/kg、8.9mg/kg组、阿司匹林组。给药6日后腹腔注射0.6%醋酸,观察扭体潜伏期,前10min扭体次数,后10min扭体次数,总共20min扭体次数。结果:与对照组相比,蜘蛛香环烯醚萜各给药组扭体潜伏期无明显变化,前10min扭体次数,后10min扭体次数,总共20min扭体次数均明显减少（P<0.01）。表明蜘蛛香环烯醚萜对化学刺激所致疼痛,有显著的镇痛作用。结论:蜘蛛香为缬草属植物,现代药理研究发现其有很好的镇静催眠和抗焦虑抗抑郁作用。本实验研究发现蜘蛛香环烯醚萜通过增强慢性应激所致的IBS模型大鼠的活动能力和兴趣缺失,降低摄食量,对精神活动有一定的改善作用。同时,蜘蛛香环烯醚萜可显著降低醋酸所致小鼠的扭体次数,说明其有良好的镇痛作用。3蜘蛛香环烯醚萜治疗肠易激综合征机理3.1蜘蛛香环烯醚萜对5-HT神经递质的影响3.1.1蜘蛛香环烯醚萜对外周和中枢5-HT含量的影响目的:探讨蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激所致IBS大鼠结肠、血清和脑中5HT、5-HIAA的影响方法:动物随机分为对照组、模型组、昂丹司琼组、氟西汀组、蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg、6.23mg/kg组,除对照组外,其余各组进行慢性应激实验。取血清、结肠和下丘脑以高压液相法检测5-HT和5-HIAA含量,取脑以免疫组化法观察海马和杏仁核5-HT含量,并用imag-pro plus图像分析软件对5-HT免疫染色阳性细胞面积（Area）、积分光密度（IOD）进行半定量分析。结果:对结肠5-HT的影响造模后,模型组动物结肠中5-HT含量明显增加,5-HIAA含量及5-HT/5-HIAA比值无明显变化。蜘蛛香环烯醚萜各组均可明显降低结肠中5-HT的含量（P<0.05）,24.92mg/kg组和6.23mg/kg可显著降低5-HT/5-HIAA比值（P<0.05）,24.92mg/kg可明显降低结肠中5-HIAA的含量（P<0.05）。对血清5-HT的影响造模后,模型组动物血清中5-HT含量明显增加（P<0.01）,5-HIAA含量无明显变化,5-HT/5-HIAA比值增加（P<0.05）。蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg组可降低血清中5-HT的含量及5-HT/5-HIAA比值（P<0.05）,但5-HIAA含量无明显变化。对下丘脑5-HT的影响模型组动物下丘脑中5-HT含量明显下降（P<0.05）,5-HIAA及5-HT/5-HIAA变化不明显。蜘蛛香12.46mg/kg、6.23mg/kg剂量组可明显升高5-HT（P<0.05）,但5-HT/5-HIAA没有明显变化。对海马和杏仁核5-HT的影响造模后,模型组大鼠阳性细胞面积和积分光密度降低（P<0.05）。蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg组较模型组有明显上升（P<0.05）。以上结果表明蜘蛛香环烯醚萜可以降低外周IBS模型大鼠结肠、血清的5-HT含量,可升高中枢下丘脑、海马及杏仁核中的5-HT含量。3.1.2蜘蛛香环烯醚萜对大鼠5-HT合成限速酶的影响目的:蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激所致IBS大鼠色氨酸羟化酶mRNA表达的影响方法:动物随机分为对照组、模型组、昂丹司琼组、氟西汀组、蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg、6.23mg/kg组,除对照组外,其余各组进行慢性应激实验。取动物肛门上方3cm处结肠,以RT-PCR方法检测各组及蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg组结肠的TPH1表达。结果:造模后,模型组和各用药组之间TPH1 mRNA水平差异不显著。表明蜘蛛香环烯醚萜不影响色氨酸羟化酶的转录表达。3.1.3蜘蛛香环烯醚萜对5-HT受体的影响目的:探讨蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激所致IBS大鼠5-HT3受体mRNA表达的影响方法:动物随机分为对照组、模型组、昂丹司琼组、氟西汀组、蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg、6.23mg/kg组,除对照组外,其余各组进行慢性应激实验。取动物肛门上方3cm处结肠,以RT-PCR方法检测各组及蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg组结肠的mRNA表达。结果:造模后,模型组的5-HTR3A/β-Actin比值明显高于对照组,说明慢性应激可引起大鼠结肠的5-HTR3A表达上调;蜘蛛香环烯醚萜组与模型组相比,5-HTR3A/β-Actin比值显著降低,5-HTR3A受体表达水平发生了相应下调。表明蜘蛛香环烯醚萜可抑制5-HT3A受体的转录。结论:蜘蛛香环烯醚萜通过降低结肠、血清中5-HT含量,下调结肠5-HTR3A受体表达水平改善IBS胃肠道症状;其对5-HT含量的影响不是通过抑制色氨酸羟化酶实现的。造模后,中枢5-HT呈现降低趋势,这可能是导致动物出现活动能力下降和兴趣缺失的原因之一,蜘蛛香环烯醚萜可以增加下丘脑、海马和杏仁核中5-HT含量,推断蜘蛛香环烯醚萜可通过干预中枢的5-HT通路来改善IBS精神症状。3.2蜘蛛香环烯醚萜对胃肠激素的影响目的:探讨蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激所致IBS大鼠SP和VIP的影响方法:动物随机分为对照组、模型组、昂丹司琼组、氟西汀组、蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg、6.23mg/kg组。除对照组外,其余各组进行慢性应激实验。以放免法检测动物结肠和血浆中SP和VIP含量。结果:对结肠SP和VIP的影响造模后,模型组结肠中SP有升高趋势,VIP有降低趋势,但均无统计学意义。蜘蛛香环烯醚萜各剂量组结肠中SP较模型组有降低趋势,VIP则有升高趋势,可降低SP/VIP值。对血浆SP和VIP的影响造模后,模型组大鼠血浆中SP和VIP均上升,其中VIP上升明显（P<0.05）。蜘蛛香环烯醚萜各组对血浆中SP和VIP有下降趋势,其中24.92mg/kg组较模型组下降明显（P<0.05）,6.23mg/kg组SP下降显著（P<0.05）。结论:蜘蛛香环烯醚萜可能通过降低结肠和血浆中SP含量,降低结肠SP/VIP值,降低内脏敏感性,改善胃肠功能亢进所出现的症状。3.3蜘蛛香环烯醚萜对免疫系统的影响目的:蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激所致IBS大鼠肥大细胞的影响方法:动物随机分为对照组、模型组、昂丹司琼组、氟西汀组、蜘蛛香环烯醚萜24.92mg/kg、12.46mg/kg、6.23mg/kg组。除对照组外,其余各组进行慢性应激实验。取距肛门3cm处的结肠行甲苯胺蓝染色,以低倍显微镜观察肥大细胞分布。结果:造模后,模型组较对照组肥大细胞明显增多,与模型组比较,蜘蛛香环烯醚萜各组结肠粘膜固有层及粘膜下层血管周围肥大细胞数量减少。表明蜘蛛香环烯醚萜可能减少结肠中肥大细胞数量。结论:蜘蛛香环烯醚萜可能通过降低肥大细胞渗出,调节免疫系统状态参与IBS的治疗。综上所述,蜘蛛香环烯醚萜可以抑制胃肠功能亢进,降低内脏敏感性,改善精神状态,并具有良好的镇痛作用,从而改善腹泻型IBS的临床症状。其机制可能涉及了蜘蛛香环烯醚萜对外周和中枢的5-HT系统、胃肠激素系统及肥大细胞免疫系统的调节作用。课题首次确定了蜘蛛香治疗IBS的有效部位为环烯醚萜类成分,并对其作用机制从神经递质,胃肠激素及免疫系统等不同方面进行了研究,为发掘具有我国民族特色的药用资源,深入探讨其物质基础和作用机理提供了科学依据。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 上篇 文献研究
• 综述一 肠易激综合征的现代医学研究概况
• 参考文献
• 综述二 肠易激综合征的中医药研究概况
• 参考文献
• 综述三 肠易激综合征的动物模型研究进展
• 参考文献
• 综述四 5-HT与肠易激综合征
• 参考文献
• 综述五 苗药蜘蛛香的研究概况
• 参考文献
• 下篇 实验研究
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 蜘蛛香环烯醚萜对胃肠功能的影响
• 实验一 蜘蛛香环烯醚萜对正常小鼠胃肠运动的影响
• 材料与方法
• 结果
• 实验二 蜘蛛香环烯醚萜对利血平化小鼠胃肠运动的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验三 蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激致IBS模型大鼠胃肠功能的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 蜘蛛香环烯醚萜对神经系统功能的影响
• 实验一 蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激致IBS模型大鼠精神活动的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验二 蜘蛛香环烯醚萜对小鼠镇痛实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第三部分 蜘蛛香环烯醚萜治疗肠易激综合征机理探讨实验
• 实验一 蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激致IBS模型大鼠结肠、血清及中枢中 5-HT 和 5-HIAA 的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验二 蜘蛛香的环烯醚萜类成分对慢性应激模型大鼠 5-HT3 受体 mRNA 表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验三 蜘蛛香的环烯醚萜类成分对慢性应激模型大鼠色氨酸羟化酶（TPH1） 的 mRNA 表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验四 蜘蛛香环烯醚萜对漫性应激致 IBS 模型大鼠胃肠激素的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验五 蜘蛛香环烯醚萜对慢性应激致 IBS模型大鼠结肠肥大细胞的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 结论
• 附图
• 致谢
• 个人简历