论文摘要
研究目的探讨二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）体外抑制人肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖作用、诱导凋亡作用及可能的分子机理。研究方法（1）采用MTT、细胞计数、细胞活力检测DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的抑制增殖作用;（2）倒置显微镜,普通光学显微镜,荧光显微镜观察DADS对体外培养的人肺癌H446细胞的形态学改变;（3）DNA琼脂糖凝胶电泳实验观察凋亡条带;（4）流式细胞仪检测DADS对H446细胞的细胞周期阻滞作用和细胞凋亡率的影响;（5）激光共聚焦显微镜检测DADS对H446细胞内Ca2+变化的影响;（6）利用免疫组织化学（S-P法）检测用药前后H446细胞内Bcl-2和PCNA蛋白表达的变化,初步探讨DADS在体外对人肺癌H446细胞诱导凋亡作用的可能机制。结果（1）MTT结果显示:DADS作用H446细胞后,明显抑制细胞增殖且抑制率呈现浓度和时间依赖性关系;细胞计数结果表明:DADS作用H446细胞后呈浓度依赖性延长细胞群体倍增时间。（2）形态学观察结果显示: DADS处理H446细胞后,作用早期细胞即可出现凋亡形态学变化。（3）琼脂糖凝胶电泳结果显示:DADS可诱导H446细胞产生凋亡细胞的典型梯状条带。（4）流式细胞术检测结果显示:DADS处理H446细胞后Go/G1期细胞比例下降,而G2/M期细胞比例则显著增加;药物诱导组细胞凋亡率明显高于非诱导组。（5）激光共聚焦结果显示:DADS处理H446细胞后,处理组荧光强度明显高于未处理组,提示DADS促进细胞内Ca2+水平升高。（6）免疫组织化学结果显示:DADS处理细胞48h后,BCL-2表达减弱,PCNA蛋白表达下调。结论1.DADS对人小细胞肺癌H446细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关。2.DADS能阻滞H446细胞周期于G2/M期,并具有诱导其凋亡的作用,其分子机制可能与其下调Bcl-2、PCNA蛋白表达有关。3.DADS诱导H446细胞凋亡可能与细胞内Ca2+水平升高相关。
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