毛细管电泳法在手性药物分离分析中的应用研究

论文摘要

全文共分六个部分,主要内容如下:第一章前言毛细管电泳对手性药物分离分析具有独特的优点。本章介绍了毛细管电泳法的拆分机理、毛细管电泳检测方式、分离模式和分离条件的选择。综述了近5年毛细管电泳在手性药物分离分析中的应用,并提出了本论文的研究背景及意义。第二章毛细管电泳电导法分离与测定盐酸布比卡因注射液中对映体的含量建立毛细管电泳-电导检测法分离测定盐酸布比卡因注射液中对映体含量的方法。采用熔融石英毛细管柱（60 cm×25μm i.d）,以4 mmol/L NH4Ac-4 mmol/L NaAc （以HAc调至pH 4.00）-0.48 mmol/L磺丁基醚-β-环糊精（SBE-β-CD）为运行缓冲液,分离电压12 kV,电动进样3 s。盐酸布比卡因对映体在15 min内得到基线分离,左旋布比卡因在0.1～10.4μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9994）,检测限为0.052μg/ml。对影响对映体分离的因素,如手性选择剂的类型及浓度、运行缓冲体系的组成及浓度、pH值、分离电压和毛细管内径及长度进行了探讨,并通过计算机辅助分子模拟软件计算药物与不同环糊精的结合能,对盐酸布比卡因与环糊精手性拆分的立体选择性进行了初步的探讨。本法与HPLC法相比,具有高效、快速和经济等优点。第三章毛细管电泳电导法分离与测定兔血清中盐酸布比卡因对映体的浓度建立兔血清中盐酸布比卡因对映体的毛细管电泳-电导检测的手性分离方法。兔血清样品碱化后,用三氯甲烷-乙醚（10∶1）提取,以4 mmol/L NH4Ac-4 mmol/L NaAc （以HAc调至pH 4.00）- 0.48mmol/L SBE-β-CD为运行缓冲液,分离电压12 kV,电动进样3 s。盐酸布比卡因对映体在16 min内实现基线分离且不受内源性物质干扰。本试验高效、快速、低耗,适用于盐酸布比卡因对映体体内血药浓度的测定。第四章毛细管电泳法分离与测定尼群地平和尼莫地平片中对映体的含量建立毛细管电泳拆分并测定尼群地平片和尼莫地平片中对映体含量的方法。采用熔融石英毛细管柱（62 cm×75μm i.d,有效长度55 cm）,以40 mmol/L磷酸二氢钠溶液（以磷酸调至pH 2.96）-10 mmol/L SBE-β-CD为运行缓冲液,分离电压-15 kV,检测波长237 nm。尼群地平和尼莫地平对映体得到基线分离,分离度分别为3.43和2.08。尼群地平和尼莫地平分别在5.016～50.16μg/ml和5.024～50.24μg/ml浓度范围内线性关系良好,检测限分别为2.006μg/ml和2.010μg/ml。尼群地平R和S型对映体的平均回收率分别为95.86%和97.04%,RSD为1.15%和2.06%,尼莫地平R和S型对映体的平均回收率分别为92.76%和97.54%,RSD为2.33%和1.49%。考察了环糊精浓度、缓冲液浓度和pH、分离电压等对分离分析的影响,并运用计算机辅助分子模拟技术对环糊精与对映体间的拆分机理进行初步探讨。第五章毛细管电泳法分离与测定大鼠血浆中尼群地平和尼莫地平对映体的浓度建立血浆中尼群地平和尼莫地平对映体的毛细管电泳手性分离分析方法。以对硝基苯甲酸为内标,血浆样品碱化后以乙醚提取2次,运行缓冲液为40 mmol/L磷酸二氢钠溶液（以磷酸调至pH 2.96）-10 mmol/L SBE-β-CD,检测波长为237 nm,尼群地平分离电压为-18 kV,尼莫地平分离电压为-15 kV,电动进样10 s。尼群地平和尼莫地平两对映体均达到基线分离,且不受杂质干扰,尼群地平和尼莫地平分别在28.4568 ng/ml和27.4548 ng/ml范围内线性关系良好,检测限分别为11.4 ng/ml和11.0 ng/ml。本方法快速、简单、低耗,适用于尼群地平和尼莫地平在体内立体选择性的研究。第六章毛细管电泳法分离与测定瑞格列奈片中对映体的含量建立毛细管电泳分离与测定瑞格列奈片中对映体含量的方法。采用熔融石英毛细管柱（67 cm×75μm i.d,有效长度60 cm）,以20 mmol/L Tris（以磷酸调至pH 3.90）-20 mmol/L羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）为运行缓冲液,分离电压20 kV,检测波长243 nm,瑞格列奈对映体实现了基线分离。瑞格列奈在5.0050.0μg/ml浓度范围内线性关系良好,检测限为0.25μg/ml,S-（+）-瑞格列奈平均回收率为97.15% ,RSD为1.21%。考察了环糊精的类型和浓度、缓冲液的组成和浓度、pH值、分离电压等的影响,并对环糊精与对映体间的拆分机理进行探讨。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 毛细管电泳技术
• 1.1.1 毛细管电泳手性分离原理
• 1.1.2 毛细管电泳检测方式
• 1.1.3 毛细管电泳手性分离基本策略
• 1.1.4 毛细管电泳的分离模式
• 1.1.5 分离条件的选择
• 1.2 毛细管电泳在手性药物拆分中的应用
• 1.2.1 毛细管区带电泳在手性药物拆分中的应用
• 1.2.2 毛细管电泳其它模式在手性药物拆分中的应用
• 1.2.3 柱涂层
• 1.3 毛细管电泳法的前景展望
• 1.4 本课题研究背景及意义
• 参考文献
• 第二章 毛细管电泳电导法分离与测定盐酸布比卡因注射液中对映体的含量
• 2.1 仪器和试药
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 溶液的制备
• 2.2.2 电泳条件
• 2.2.3 方法学考察
• 2.2.4 样品测定
• 2.3 讨论
• 2.3.1 手性选择剂类型及其浓度的选择
• 2.3.2 计算机分子模拟拆分机理的原理
• 2.3.3 缓冲溶液及其浓度的选择
• 2.3.4 pH 值的影响
• 2.3.5 毛细管内径及长度的影响
• 2.3.6 分离电压和进样方式的选择
• 参考文献
• 第三章 毛细管电泳电导法分离与测定兔血清中盐酸布比卡因对映体的浓度
• 3.1 仪器和试药
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 溶液的制备
• 3.2.2 电泳条件
• 3.2.3 方法学考察
• 3.2.4 含量测定
• 3.3 讨论
• 3.3.1 提取方法的考察
• 3.3.2 样品介质的考察
• 3.3.3 分离电压的考察
• 3.4 结论
• 参考文献
• 第四章 毛细管电泳法分离与测定尼群地平和尼莫地平片中对映体的含量
• 4.1 仪器和试药
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 溶液的制备
• 4.2.2 电泳条件
• 4.2.3 方法学考察
• 4.2.4 样品测定
• 4.3 讨论
• 4.3.1 SBE-β-CD 浓度对分离的影响
• 4.3.2 背景缓冲溶液的选择与pH 的优化
• 4.3.3 拆分机理探讨
• 4.3.4 分离电压和进样方式的影响
• 参考文献
• 第五章 毛细管电泳法分离与测定大鼠血浆中尼群地平和尼莫地平对映体的浓度
• 5.1 仪器和试药
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 溶液的制备
• 5.2.2 电泳条件
• 5.2.3 尼群地平方法学考察
• 5.2.4 尼莫地平方法学考察
• 5.2.5 含量测定
• 5.3 讨论
• 5.3.1 提取方法的考察
• 5.3.2 进样方法和样品介质的考察
• 5.3.3 分离电压的考察
• 5.4 结论
• 参考文献
• 第六章 毛细管电泳法分离与测定瑞格列奈片中对映体的含量
• 6.1 仪器和试药
• 6.2 实验部分
• 6.2.1 溶液的制备
• 6.2.2 电泳条件
• 6.3 讨论与结果
• 6.3.1 环糊精种类和浓度对分离的影响
• 6.3.2 拆分机理探讨
• 6.3.3 背景缓冲溶液的选择与pH 的优化
• 6.3.4 进样时间和电压的选择
• 6.3.5 毛细管长度和内径的选择
• 6.3.6 内标物的选择
• 6.3.7 样品介质的考察
• 6.3.8 有机添加剂的考察
• 6.3.9 方法学考察
• 6.3.10 样品测定
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表及待发表的文章
• 致谢