论文摘要
鸡白细胞介素-2（IL-2）是一种在机体免疫调节中具有多种功能的细胞因子,关于它的研究已成为免疫学研究的热点之一。利用载体对IL-2进行体内、体外表达,更是呈现出广阔的发展前景。目前,鸡IL-2的生物学鉴定主要依赖于ConA刺激的预激活T淋巴细胞以及由T淋巴细胞增殖实验所决定的IL-2的活性。然而,这些实验费时、费力、敏感性低,而且受很多因素,如培养物、抑制因子以及其它生长因子的影响。因此为了有效的鉴定鸡IL-2的表达、表达量及鸡体内IL-2的一些动态变化,我们迫切需要一种简单、快速、敏感性高的检测方式。 研制鸡IL-2单克隆抗体（简称单抗）将为我们以后建立一种快捷的检测鸡IL-2的方式奠定基础。但商品化的鸡IL-2很昂贵,其免疫原性弱,且常规法难以研制。因此我们采用真核表达质粒作基因免疫,原核表达产物作筛选抗原的研究方案。 将鸡IL-2 cDNA（本实验室邵卫星博士惠赠）,克隆入真核高效表达载体pcDNA3.1（+）中,构建pcDNA-IL-2重组表达质粒。经PCR和双酶切鉴定,克隆正确。同时构建pcDNA-IL-GFP重组表达质粒（即GFP基因与IL-2的一段上游基因融合表达）,脂质体法将其转染COS-1细胞,荧光显微镜下可观察到特异性的绿色荧光,从而提示:重组表达载体pcDNA-IL-2体外表达成功。 将鸡IL-2 cDNA克隆到原核表达载体pET-30a（+）上,构建原核重组表达质粒pET-IL-2,并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,SDS-PAGE检测表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。将诱导后的工程菌超声波裂解,离心后的沉淀用PBS洗涤5-6次,得到高纯度的目的蛋白。 以重组表达质粒pcDNA-IL-2作为免疫原, 取6周龄的BALB/c小鼠,每只
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