体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

论文摘要

目的:（1）通过体外分离、培养人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,观察其生物学特性;（2）对培养的hMSCs行体外药物诱导,促其向心肌样细胞分化。 方法:采用Ficoll淋巴细胞分离液分离人骨髓单个核细胞,所获取的细胞置于含10%胎牛血清的L-DMEM中培养,通过传代获得纯度较高的hMSCs,应用流式细胞仪鉴定hMSCs。在第四代传代时加入5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L 5-杂氮胞苷对hMSCs进行诱导,24h后更换为完全培养基继续培养。分别在诱导后第2～8W利用结蛋白抗体、心钠素抗体以及闰盘蛋白抗体进行免疫组化染色,并于第2～4W利用超薄切片透射电镜观察诱导细胞的超微结构。 结果:诱导前hMSCs表面抗原CD34、CD45、CD31阴性,CD90为弱阳性,经反复多次传代后（15代以上）,细胞形态及抗原表达无改变,始终保持未分化状态和稳定扩增。利用5-杂氮胞苷对其诱导后第2W始,免疫组化染色发现细胞结蛋白、闰盘蛋白的阳性率为20%～30%,心肌细胞特异性抗原心钠素也为阳性,不同浓度5-杂氮胞苷诱导组之间无显著差异。超薄切片透射电镜观察发现这些细胞的细胞核位于中央,少数细胞为双核或者多核,细胞核周围聚集有丰富的房性颗粒样结构,直径为100～200nm;部分细胞中可见细小的肌丝样结构。 结论:（1）以Ficoll分离液分离人骨髓单个核细胞,同时利用hMSCs贴壁生长的特性,可以有效获得hMSCs。（2）hMSCs具有很强的自我复制能力,并能够在连续的体外培养过程中保持未分化状态。（3）hMSCs具有多向分化潜能,在体外利用5-杂氮胞苷可以诱导hMSCs向心肌样细胞分化。

论文目录

• 一、英文缩略词表
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、正文
• 1.引言
• 2.材料与方法
• 3.实验结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 6.文献
• 五、附录
• 六、致谢
• 七、综述
• 1.正文
• 2.文献