中国荷斯坦牛隐性乳房炎发生规律及IL-8基因5’侧翼区和LAO多态性与泌乳性状的关联分析

论文摘要

奶牛隐性乳房炎是危害奶牛养殖业最常见的疾病之一,隐性乳房炎不仅影响奶牛产奶量和乳品质,而且造成奶牛业严重的经济损失。本试验通过对扬州地区奶牛场泌乳牛群隐性乳房炎的调查,分析其发生规律,并对主要致病菌进行分离培养和鉴定。通过PCR-SSCP、PCR-RFLP和测序相结合的方法,研究LAO基因和IL-8基因5’侧翼区多态性,并采用最小二乘法对其多态性与奶牛泌乳性状及体细胞评分（SCS）的相关关系进行初步研究。本研究包括以下试验：试验一：从2009年到2010年共8个月份对扬州地区某牧场的泌乳奶牛进行BMT检测,研究发病率与胎次、季节、泌乳月等因素之间的关系。试验结果表明：1、共检测2162头次奶牛8034个乳区,头数发病率为30.02%,乳区发病率为14.48%。2、隐性乳房炎的发病率随着胎次的增加而上升,差异极显著（P<0.01）。3、奶牛隐性乳房炎的发病率随季节的变化而变化,差异极显著（P<0.1）,其中以9月份最高（46.23%）。4、在泌乳期,随着泌乳月份的增加,隐性乳房炎的发病率总体上呈上升趋势,差异极显著（P<0.01）。试验二：试验对象是4个奶牛场310头无临床症状的荷斯坦奶牛,采用微生物学方法对隐性乳房炎的主要致病菌进行分离培养和鉴定。试验结果表明：1、其中139头患有隐性乳房炎,发病率44.84%,在1163个乳区中,患病乳区有208个,乳区患病率为17.88%。2、在208份奶样中共分离到葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌3种主要病原菌322株,其中葡萄球菌71株,占分离菌株的22.05%；大肠杆菌95株,占分离株数的29.50%；链球菌156株,占分离菌株的48.45%。3、牛只的混合感染情况表明,病原菌单独感染率为43.16%,其中链球菌的单独感染率达31.65%；病原菌混合感染率占54.68%,多为大肠杆菌和链球菌混合感染。试验三：LAO基因和IL-8基因5’侧翼区基因多态性及其与泌乳性状和SCS的关联性分析结果表明：1、在LAO基因3’侧翼区+84（A/G）位点处发生突变,有3种基因型,分别命名为AA、AB和BB型。AB基因型日产奶量极显著高于AA基因型（P<0.01）,AB基因型、AA基因型日产奶量与BB基因型之间均无显著性差异（P>0.05）。同时,该位点不同基因型与SCS的相关性不显著（P>0.05）。2、在IL-8基因5’侧翼区-233（G/A）位点处发生突变,有3种基因型,分别命名为CC、CD和DD型。CD基因型日产奶量极显著高于CC基因型（P<0.01）,DD基因型日产奶量显著高于CC基因型（P<0.05）,CD基因型日产奶量与DD基因型无显著性差异（P>0.05）；CD基因型乳糖含量极显著高于DD基因型（P<0.01）,CC基因型乳糖含量显著高于DD型（P<0.05）,CD基因型乳糖含量与CC基因型差异不显著（P>0.05）。同时,该位点不同基因型与SCS的相关性不显著（P>0.05）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 奶牛乳房炎的分类和临床表现
• 1.1.1 亚临床型乳房炎
• 1.1.2 急性临床型
• 1.1.3 急性乳房炎
• 1.1.4 慢性乳房炎
• 1.1.5 无菌型乳房炎
• 1.2 隐性乳房炎的危害
• 1.2.1 隐性乳房炎造成产奶量下降
• 1.2.2 隐性乳房炎使乳汁营养成分下降
• 1.2.3 隐性乳房炎影响食品卫生及人体健康
• 1.2.4 隐性乳房炎造成严重的经济损失
• 1.3 奶牛隐性乳房炎的发病原因
• 1.3.1 病原菌
• 1.3.2 环境因素
• 1.3.3 饲养管理
• 1.3.4 遗传因素
• 1.4 隐性乳房炎的诊断方法
• 1.4.1 乳汁病原微生物检查
• 1.4.2 乳汁体细胞计数
• 1.4.3 乳汁pH值检验
• 1.4.4 乳汁导电性检测
• 1.4.5 PCR检测方法
• 1.5 LAO基因和IL-8基因的研究进展
• 1.5.1 LAO基因的研究进展
• 1.5.2 IL-8基因的研究进展
• 1.6 研究的目的和意义
• 第二章 中国荷斯坦奶牛隐性乳房炎的发病规律
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 检测牛群
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 BMT法检测隐性乳房炎
• 2.1.4 统计方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 奶牛隐性乳房炎的发病率
• 2.2.2 奶牛隐性乳房炎发病率与胎次之间的关系
• 2.2.3 奶牛隐性乳房炎发病率与季节的关系
• 2.2.4 奶牛隐性乳房炎发病率与泌乳月之间的关系
• 2.3 讨论
• 2.3.1 奶牛隐性乳房炎的发病率
• 2.3.2 奶牛隐性乳房炎发病率与胎次之间的关系
• 2.3.3 奶牛隐性乳房炎发病率与季节的关系
• 2.3.4 奶牛隐性乳房炎发病率与泌乳月之间的关系
• 第三章 中国荷斯坦奶牛隐性乳房炎主要病原菌的分离鉴定
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 待检奶牛
• 3.1.2 乳样的采集
• 3.1.3 培养基
• 3.1.4 主要仪器设备
• 3.1.5 试剂
• 3.1.6 培养基的配制方法
• 3.1.7 主要病原菌分离与鉴定方法
• 3.2 试验结果
• 3.2.1 隐性乳房炎检测结果
• 3.2.2 主要病原菌的分离鉴定结果
• 3.2.3 病原菌混合感染情况
• 3.3 讨论
• 3.3.1 隐性乳房炎发生情况分析
• 3.3.2 主要病原菌感染情况分析
• 3.3.3 主要病原菌混合感染情况分析
• 第四章 LAO基因、IL-8基因5'侧翼区多态性与荷斯坦奶牛泌乳性状的关联性分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 主要仪器
• 4.1.3 试验试剂
• 4.1.4 主要试剂的配制方法
• 4.1.5 牛血液DNA的提取
• 4.1.6 DNA浓度和纯度的检测
• 4.1.7 引物设计
• 4.1.8 PCR扩增
• 4.1.9 SSCP分析
• 4.1.10 Hinf Ⅰ酶切
• 4.1.11 DHI测定
• 4.1.12 群体基因频率、基因型频率以及遗传特性的统计分析
• 4.1.13 统计分析模型
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 LAO基因多态性与荷斯坦奶牛泌乳性状的关联性分析
• 4.2.2 IL-8基因5'侧翼区多态性与荷斯坦奶牛泌乳性状的关联性分析
• 4.2.3 其他各因素对泌乳性状的影响
• 4.3 讨论
• 4.3.1 LAO基因多态性与泌乳性状的关系
• 4.3.2 IL-8基因5'侧翼区多态性与泌乳性状的关系
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表和参与发表的学术论文目录