论文题目: 重组腺病毒介导反义MMP2基因抑制肝癌生长和侵袭的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 张明满
导师: 严律南
关键词: 人肝细胞癌,二型基质金属蛋白酶,重组腺病毒,反义技术,基因治疗
文献来源: 四川大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的 ①构建携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad-MMP2AS,为探讨抑制肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）生长、侵袭和转移的方法提供实验基础。②分析重组腺病毒介导反义MMP2基因对人HCC细胞侵袭性的抑制作用,探讨抑制作用的机理。③观察重组腺病毒介导反义MMP2基因对人血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）生长的作用,探讨它抑制肿瘤血管生成的机理,进一步探讨其抑制HCC生长的机理。④观察重组腺病毒介导反义MMP2基因对活体HCC的抑制作用,探讨Ad-MMP2AS对HCC的治疗潜力。 方法 从Genbank查得二型基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase-2,MMP2）基因cDNA全序列,选择5′端转录起始位点附近长约500bp的基因段为目的基因片段,设计特异性克隆引物。从人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中提取总RNA,以总RNA为模板用逆转录聚合酶链反应（reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）扩增MMP2基因片段。将经基因测序证实为正确的基因片段反向克隆到重组腺病毒载体AdEasy系统中的穿梭质粒pAdTrack-CMV的多克隆位点（multiple cloning site,MCS）,构建出携带反义MMP2基因片段的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-MMP2AS;再将pAdTrack-CMV-MMP2AS与重组腺病毒载体AdEasy系统中的骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,经293细胞包装生成携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad-MMP2AS。同时,构建空白病毒（Ad-CMV）作为对照。用逐步稀释法通过荧光显微镜下计数发绿色荧光的点数（expression-forming units,efu）,检测绿色荧光蛋白（green fluorescence protein,GFP）的表达,确定Ad-MMP2AS和Ad-CMV的滴度。用感染复数（multiplicities of infection,MOI）为100的Ad-MMP2AS和Ad-CMV分别感染人肝癌细胞株（Bel-7402）和人血管内皮
论文目录:
英文缩写与中文对照
中、英文摘要
论文正文 重组腺病毒介导反义MMP2基因抑制肝癌生长和侵袭的实验研究
前言
第一部分 携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒载体的构建
实验方法
实验结果
讨论
参考文献
第二部分 重组腺病毒介导反义MMP2基因抑制人肝癌细胞株侵袭的实验研究
实验方法
实验结果
讨论
参考文献
第三部分 重组腺病毒介导反义MMP2基因抑制血管内皮细胞生长的实验研究
实验方法
实验结果
讨论
参考文献
第四部分 重组腺病毒介导反义MMP2基因抑制HCC生长的动物实验研究
实验方法
实验结果
讨论
参考文献
全文结论
实验照片
文献综述
个人简历
攻读博士学位期间主要科研成绩简介
致谢
发布时间: 2005-11-09
参考文献
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