包埋脱水法超低温保存海带雌、雄配子体的研究

论文摘要

本文以海带日长雌、雄配子体(gametophytes of Laminaria japonica Aresch)为试验材料,用包埋脱水法进行超低温冰冻保存。将海带雌、雄配子体分别打碎成小段后包埋在3%褐藻酸钙胶球中,经过蔗糖预培养一段时间,再用硅胶吸湿法脱水后,进行保存。探讨了蔗糖浓度和预培养时间、脱水速率、胶球含水量对超低温保存存活率的影响;保存后配子体的发育情况,结果表明: 1. 蔗糖浓度和预培养时间对海带雌、雄配子体超低温保存存活率的影响蔗糖预培养对雌、雄配子体冰冻前后存活率的影响较大。雌、雄配子体的最佳预培养条件不同,雌配子体在蔗糖浓度0.4mol/L预培养9h,存活率达45.9%;雄配子体在蔗糖浓度0.3mol/l 预培养9h,存活率达29.7%。2. 脱水速率对海带雌、雄配子体超低温保存存活率的影响包埋后,分别以不同脱水速率(1%、5%、8%、10%、12%、15%、20%含水量/h)脱水,结果雌、雄配子体都在10%含水量/h的脱水速率获得最高存活率,分别为49.8%和34.6%。3. 胶球含水量对海带雌、雄配子体超低温保存存活率的影响胶球含水量对脱水过程的存活率影响不大,但对冰冻保存的存活率影响很大。雌、雄配子体的最佳含水量都是40%,冰冻后存活率分别为49.6%和34.2%。4. 超低温冰冻保存前后海带配子体发育情况镜检观察,经过超低温保存后的海带配子体,在与冰冻保存前的材料相同的条件下培养,可以发育成幼孢子体,形态与保存前的对照没有差别。

论文目录

• 摘要
• 前言
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料、试剂和设备
• 1.1.1 材料来源及培养
• 1.1.2 重要试剂及配制
• 1.1.3 重要仪器设备
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 包埋
• 1.2.2 蔗糖预培养
• 1.2.3 脱水及含水量的测定
• 1.2.4 冰冻和化冻
• 1.2.5 化冻后的恢复
• 1.2.6 存活率测定
• 1.2.7 发育能力观察
• 1.2.8 蔗糖浓度对存活率的影响
• 1.2.9 预培养时间对存活率的影响
• 1.2.10 脱水速率对存活率的影响
• 1.2.11 含水量对存活率的影响
• 2. 结果与讨论
• 2.1 蔗糖预培养条件对海带雌、雄配子体冰冻保存存活率的影响
• 2.2 脱水速率对海带雌、雄配子体冰冻保存存活率的影响
• 2.3 含水量对海带雌、雄配子体冰冻保存存活率的影响
• 2.4 海带配子体冰冻保存后的发育能力
• 3. 结论
• 4. 综述
• 4.1 低温生物学和超低温保存技术
• 4.1.1 低温生物学的定义
• 4.1.2 低温生物学和超低温保存技术的发展
• 4.1.3 生物材料超低温保存技术的应用及意义
• 4.2 植物种质超低温保存的原理及主要方法
• 4.2.1 植物种质超低温保存的原理及理论基础
• 4.2.2 细胞受冻伤的某些机制
• 4.2.2.1 冷却过程细胞受到的伤害
• 4.2.2.2 复温过程细胞受到的损伤
• 4.2.2.3 抗冻保护剂的种类、浓度及其加入、取走的方式
• 4.2.3 超低温保存植物种质技术的研究进展
• 4.2.3.1 两步冰冻法
• 4.2.3.2 快速冷冻法
• 4.2.3.3 玻璃化法
• 4.2.3.4 包埋（胶囊化）脱水法
• 4.2.3.5 其他保存方法
• 4.3 藻类超低温保存的研究概况
• 4.3.1 藻类超低温保存的目的和意义
• 4.3.2 藻类超低温保存的方法和操作程序
• 4.3.3 影响藻类超低温保存存活率的主要因素
• 4.3.3.1 冰冻保存程序
• 4.3.3.2 细胞因素
• 4.3.4 存活率测定方法
• 4.3.5 藻类保存技术的研究进展
• Abstract
• 参考文献
• 致谢
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