紫花苜蓿再生体系的建立及农杆菌介导的BADH基因转化研究

论文摘要

紫花苜蓿（Medicago sativa）为生长面积最大,利用价值最高的优质牧草。如何进一步提高其耐盐碱抗旱特性,扩大其种植范围,是当前苜蓿生产面临的重要研究课题,基因工程的发展和应用为苜蓿抗盐育种开辟了一条新的途径。本研究探讨了和田、阿尔冈金、甘农1号、甘农3号、甘农4号、陇中、德福、牧歌、润不勒、三得利10个苜蓿品种组织培养程序,确定出再生能力最强的品种及外植体。利用农杆菌介导法转化BADH（甜菜碱醛脱氢酶）基因,建立了一套农杆菌介导苜蓿基因转化的优化体系,主要研究结果如下:1.再生体系的建立试验表明,苜蓿不同品种间再生能力差异较大,在试验中所采用的10个品种中,再生能力的强弱依次为:甘农4号﹥牧歌﹥陇中﹥三得利﹥阿尔冈金﹥德福﹥润不勒﹥甘农3号﹥甘农1号﹥和田。胚轴是紫花苜蓿最佳的愈伤诱导外植体材料,最佳诱导培养基是MS+2mg/L2,4-D+0.25mg/LKT+30g/L蔗糖,愈伤组织诱导的最佳品种是甘农4号。10个品种最适的分化培养基为MS+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+20g/L蔗糖。最佳诱导生根的培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+15g/L蔗糖。综合考虑各品种再生能力的强弱,最后确定以甘农4号苜蓿作为基因转化受体。2. BADH基因转化体系的建立以侵染后甘农4号号外植体的抗性愈伤组织出愈率、抗性芽形成率以及抗性苗的获得为指标建立了转化体系。以培养7天的甘农4号的胚轴为受体材料,预培养3天,用于转化的侵染时间为10 min,脱菌中使用500mg/L的羧苄青霉素,菌液浓度为OD6000.3～0.5,共培养3天,50mg/L Kan的选择压下筛选90多天。通过上述转化体系获得了5株抗卡那霉素的再生植株,经PCR检测,均表现为阳性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 前言
• 2 文献综述
• 2.1 紫花苜蓿再生体系研究进展
• 2.2 苜蓿基因工程的研究进展
• 2.3 植物耐盐机理及耐盐基因工程
• 第二章 10 个紫花苜蓿品种再生体系的建立
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 10 种紫花苜蓿不同外植体愈伤组织的诱导
• 2.2 10 种紫花苜蓿愈伤组织的分化培养
• 2.3 不同NAA 浓度对再生苗生根的影响
• 3 小结
• 第三章 农杆菌介导BADH 基因对紫花苜蓿的转化
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 选择培养中抗菌素及其浓度的确定
• 2.2 选择培养基中卡那霉素选择压的确定
• 2.3 转化体系的建立
• 3 小结
• 第四章 结论与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 个人简介
• 导师简介
• 指导老师简介