李晓菲:猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan-MGB实时荧光定量RT-PCR方法的建立及应用论文

李晓菲:猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan-MGB实时荧光定量RT-PCR方法的建立及应用论文

本文主要研究内容

作者李晓菲,陈婷,魏笑笑,孙爱荣,黄艳,葛晓杰,徐婷,王彩宏,秦立廷(2019)在《猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan-MGB实时荧光定量RT-PCR方法的建立及应用》一文中研究指出:为了快速、准确地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV),本研究根据PRRSV基因序列设计特异性引物和探针,建立了一种可同时检测PRRSV经典毒株、高致病性变异毒株以及近几年中国新出现的NADC30-like毒株的TaqMan-MGB实时荧光定量方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证,同时用建立的实时荧光定量方法与常规PCR方法对临床收集的120份疑似PRRSV样品进行检测。结果表明,该方法特异性良好,对PRRSV的经典毒株、高致病性变异毒株及NADC30-like毒株均有良好的扩增,但对猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性,无交叉反应;模板浓度在101~108拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,标准曲线结果显示其扩增的相关系数为0.9999,扩增效率为93%;敏感性高,约是常规PCR方法的100倍,最低可以检测到101拷贝/μL的模板;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数分别为0.17%~0.90%和0.65%~2.34%;用本研究所建立的实时荧光定量检测方法对120份临床样品进行检测,PRRSV阳性检出率为59.2%(71/120),而常规PCR方法的PRRSV阳性检出率为44.2%(53/120)。该方法的建立为PRRSV的实验室诊断、流行病学调查,以及预防和控制中国PRRSV的流行提供了快速、准确的检测手段。

Abstract

wei le kuai su 、zhun que de jian ce zhu fan shi yu hu xi zeng ge zheng bing du (porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV),ben yan jiu gen ju PRRSVji yin xu lie she ji te yi xing yin wu he tan zhen ,jian li le yi chong ke tong shi jian ce PRRSVjing dian du zhu 、gao zhi bing xing bian yi du zhu yi ji jin ji nian zhong guo xin chu xian de NADC30-likedu zhu de TaqMan-MGBshi shi ying guang ding liang fang fa ,bing dui gai fang fa de te yi xing 、min gan xing he chong fu xing jin hang yan zheng ,tong shi yong jian li de shi shi ying guang ding liang fang fa yu chang gui PCRfang fa dui lin chuang shou ji de 120fen yi shi PRRSVyang pin jin hang jian ce 。jie guo biao ming ,gai fang fa te yi xing liang hao ,dui PRRSVde jing dian du zhu 、gao zhi bing xing bian yi du zhu ji NADC30-likedu zhu jun you liang hao de kuo zeng ,dan dui zhu wen bing du (CSFV)、zhu liu hang xing fu xie bing du (PEDV)、zhu chuan ran xing wei chang yan bing du (TGEV)、zhu lun zhuang bing du (RV)、zhu wei kuang quan bing bing du (PRV)、zhu xi xiao bing du (PPV)he zhu yuan huan bing du 2xing (PCV2)de jian ce jie guo jun wei yin xing ,mo jiao cha fan ying ;mo ban nong du zai 101~108kao bei /μLfan wei nei ju you liang hao de xian xing guan ji ,biao zhun qu xian jie guo xian shi ji kuo zeng de xiang guan ji shu wei 0.9999,kuo zeng xiao lv wei 93%;min gan xing gao ,yao shi chang gui PCRfang fa de 100bei ,zui di ke yi jian ce dao 101kao bei /μLde mo ban ;chong fu xing hao ,pi nei he pi jian chong fu xing shi yan bian yi ji shu fen bie wei 0.17%~0.90%he 0.65%~2.34%;yong ben yan jiu suo jian li de shi shi ying guang ding liang jian ce fang fa dui 120fen lin chuang yang pin jin hang jian ce ,PRRSVyang xing jian chu lv wei 59.2%(71/120),er chang gui PCRfang fa de PRRSVyang xing jian chu lv wei 44.2%(53/120)。gai fang fa de jian li wei PRRSVde shi yan shi zhen duan 、liu hang bing xue diao cha ,yi ji yu fang he kong zhi zhong guo PRRSVde liu hang di gong le kuai su 、zhun que de jian ce shou duan 。

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  • 论文详细介绍

    论文作者分别是来自中国畜牧兽医的李晓菲,陈婷,魏笑笑,孙爱荣,黄艳,葛晓杰,徐婷,王彩宏,秦立廷,发表于刊物中国畜牧兽医2019年01期论文,是一篇关于猪繁殖与呼吸综合征病毒论文,实时荧光定量方法论文,临床样品论文,中国畜牧兽医2019年01期论文的文章。本文可供学术参考使用,各位学者可以免费参考阅读下载,文章观点不代表本站观点,资料来自中国畜牧兽医2019年01期论文网站,若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权,请联系我们删除。

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