微流控单分子检测免疫分析技术的初步研究

论文摘要

本论文分为三部分:Ⅰ.第一章,微流控单分子检测免疫分析条件的初步探讨。Ⅱ.第二章,微流控单分子检测免疫分析条件的优化及选择。Ⅲ.第三章,肿瘤相关抗原CA125的单分子检测的条件。论文第一章对微流控技术,免疫分析技术,单分子检测进行了简单的介绍,引用文献60余篇。本章重点对微流控单分子检测免疫分析的条件进行了初步探讨。研究了PDMS膜的修饰方法,盖玻片硅烷化时间,驱动电压选取,缓冲溶液的选择等条件;初步选择微流控免疫分析的条件:用新生态氧气对PDMS膜修饰2d;盖玻片硅烷化时间24h;缓冲液冲洗条件:1000V驱动电压,输出时间20min。BSA封闭条件:1000V驱动电压,输出时间10s,静止时间50s,重复这一过程80次。抗体与目标抗原的最佳孵育条件:1000V驱动电压,输出时间10s,静止时间50s,重复这一过程80次。论文第二章对微流控单分子检测免疫分析的条件在第一章的基础上做了进一步的研究。改变了储液池的直径及微通道的结构和尺寸,确定微通道的宽度150μm,深度～20μm,PDMS膜的厚度～5mm,储液池的直径2mm,通道末端21mm区域对应的载玻片进行硅烷化处理。在这一新制备的微流控芯片上,对缓冲液冲洗时间、BSA封闭时间、抗体与目标抗原孵育时间等条件做了进一步的研究。论文第三章在前面两章所找到的最佳条件的基础上,在微流控芯片上采用双抗夹心法进行免疫反应,并结合全内反射荧光显微镜单分子成像检测,探讨了检测人卵巢癌抗原CA125的相关条件。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 第一章 微流控单分子检测免疫分析条件的初步探讨
• 1.1 引言
• 1.2 实验部分
• 1.2.1 实验仪器
• 1.2.2 材料与试剂
• 1.2.3 实验方法
• 1.2.3.1 微流控芯片的制作
• 1.2.3.2 PDMS膜的表面修饰
• 1.2.3.3 高压驱动装置操作
• 1.2.3.4 微流控免疫反应过程
• 1.2.3.5 背景荧光的去除
• 1.2.3.6 全内反射状态的调节
• 1.2.3.7 全内反射荧光显微镜检测单个荧光标记分子
• 1.3 结果与讨论
• 1.3.1 对PDMS膜的修饰效果
• 1.3.2 盖玻片硅烷化条件对抗原（抗体）分子固定效率的影响
• 1.3.3 微流控免疫反应
• 1.3.3.1 免疫反应缓冲溶液,驱动电压的选择
• 1.3.3.2 免疫反应驱动电压输出时间的选择
• 1.3.4 TIRFM摄取单分子图像
• 1.3.4.1 背景荧光的去除
• 1.3.4.2 图像选取范围
• 1.3.4.3 免疫反应后缓冲液冲洗时间的选择
• 1.3.4.4 BSA封闭液最佳封闭时间的选择
• 1.3.5 微通道内抗原（抗体）固定时间的选择
• 1.4 结论
• 参考文献
• 第二章 微流控单分子检测免疫分析条件的优化及选择
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 实验方法
• 2.2.1.1 微流控芯片的制作
• 2.2.1.2 微流控免疫反应过程
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 免疫反应后缓冲液冲洗时间的选择
• 2.3.2 BSA封闭液的最佳封闭时间的选择
• 2.3.3 微通道内抗原（或抗体）固定时间的选择
• 2.3.4 抗体与目标抗原结合的最佳孵育时间的选择
• 2.4 结论
• 第三章 肿瘤相关抗原CA125的单分子检测
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 实验仪器,试剂与材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.2.1 微流控免疫反应过程
• 1-Ag-Ab₂^*'>3.2.2.2 检测单个三明治免疫反应复合物Ab₁-Ag-Ab₂^*
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 生物素化的兔抗人多克隆抗体浓度的选择
• 3.3.2 链霉亲核素化的量子点同生物素化的兔抗人多克隆抗体孵育时间的选择
• 3.4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 学位论文评阅及答辩情况表