薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

论文摘要

目的研究薯蓣皂苷（Dioscin,D）对培养乳鼠心肌细胞（cardiomyocyte）缺氧/复氧损伤（hypoxia/reoxygenation damage,H/R damage）的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用体外培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以薯蓣皂苷进行干预。心肌细胞随机分为5组:空白对照组（Control,C）;缺氧/复氧组（hypoxia/reoxygenation,H/R）;薯蓣皂苷低、中、高剂量干预组（L、M、H+H/R）。分别观察各组心肌细胞搏动频率;MTT法测心肌细胞存活率;罗丹明123（Rhodamine123,Rh123）荧光探针标记线粒体,检测荧光强度以反映心肌细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,△ψm）变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nickend labeling,TUNEL）检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载心肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮（NO）浓度。结果1.细胞搏动频率:与空白对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞搏动频率显著降低（34.07±5.42 vs.99.20±5.51 beat/min,P＜0.01）;与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞搏动频率均显著升高（34.07±5.42 vs.90.45±5.40,34.07±5.42 vs.91.18±5.91,34.07±5.42 vs.97.27±5.64 beat/min,P＜0.01）。薯蓣皂苷各剂量干预组与空白对照组比较差异无显著性。2.细胞存活率:与空白对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞存活率显著降低（32.83±5.00 vs.98.50±0.80%,P＜0.01）;与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率均显著升高（32.83±5.00 vs.84.41±2.77,32.83±5.00 vs.85.54±2.57,32.83±5.00 vs.93.83±3.65%,P＜0.01）。薯蓣皂苷各剂量干预组与空白对照组比较差异无显著性。3.线粒体膜电位（△ψm）:与空白对照组比较,缺氧/复氧组△ψm显著降低（3.0±1.1vs.5.7±0.5×105,P＜0.01）;与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组△ψm均显著升高（3.0±1.1 vs.5.3±1.3,3.0±1.1 vs.5.5±1.7,3.0±1.1 vs.5.5±1.6×105,P＜0.01）。薯蓣皂苷各剂量干预组与空白对照组比较差异无显著性。4.心肌细胞调亡指数（A/I）:与空白对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞调亡指数明显升高,从28.51±3.88%上升到88.71±3.51%（P＜0.01）;与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞调亡指数均显著降低（28.51±3.88 vs.47.8±4.5,P＜0.05:28.51±3.88 vs.39.19±2.56,28.51±3.88 vs.33.62±4.08%,P＜0.01）。薯蓣皂苷各剂量干预组与空白对照组比较差异无显著性。5.心肌细胞内钙离子([Ca2+]i)荧光强度:与空白对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显加强（1887.21±692.51 vs.681.58±260.94,P＜0.01）;与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞[Ca2+]i荧光强度显著减弱（1887.21±692.51 vs.1196.37±582.75,1887.21±692.51vs.1130.97±694.56,P＜0.05;1887.21±692.51vs.907.40±414.91,P＜0.01）。薯蓣皂苷各剂量干预组与空白对照组比较差异无显著性。6.心肌细胞NO浓度:心肌细胞在一般情况下即会自发分泌一定量NO。缺氧/复氧环境未能刺激NO分泌量发生显著变化。缺氧开始后2h,缺氧/复氧组NO合成显著性增加（48.37±12.85 vs.79.32±6.71μmol/L,P＜0.01）;缺氧后7h,NO合成激增,可达对照组的3.9倍（48.37±12.85 vs.187.65±18.63μmol/L,P＜0.01）。结论从细胞水平初步证实,薯蓣皂苷对缺氧/复氧损伤的培养乳鼠心肌细胞具有重要的保护作用,保护机制可能涉及以下几方面:1.升高受损心肌细胞的线粒体膜电位,维护膜的完整性;2.减轻心肌细胞内钙超载,减少细胞调亡发生;3.抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 薯蓣皂苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞的影响
• 1 对象和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 线粒体与心肌细胞凋亡
• 综述参考文献
• 致谢