论文摘要
本研究利用流式细胞技术检测40例卵巢癌患者及10例正常健康者外周血单个核细胞中CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD4+CD25+CD127-Treg所占的比例,以及CD4+T细胞/ CD8+T细胞比率。结果显示卵巢癌患者外周血CD3+CD4+T细胞占CD4+T细胞的比例与正常健康者比较,无显著性差异;卵巢癌患者外周血CD3+CD8+T细胞占CD4+T细胞的比例与正常健康者比较,无显著性差异;卵巢癌患者外周血CD4+T细胞/ CD8+T细胞比例与正常健康者比较,无显著性差异;而CD4+CD25+CD127-Treg占CD4+T细胞的比例较正常健康者明显增高,差异具有显著性。结果表明卵巢癌患者全身免疫状态与正常健康者相比没有明显改变,而外周血中Treg的数量增高。本研究应用RT-PCR技术检测20例卵巢癌患者及10例正常健康者外周血中Treg的特异性标志FOXP3 mRNA的表达情况,以确定卵巢癌患者外周血中Treg功能。结果显示卵巢癌患者外周血中FOXP3 mRNA表达水平均明显高于正常健康者。结果表明卵巢癌患者外周血中Treg的活性增强。结合上述流式检测结果说明Treg在维持免疫耐受的同时,又干扰了机体对肿瘤的免疫应答。本研究利用免疫组织化学方法检测40例卵巢癌患者病灶中癌上皮内及间质内CD3+TILs、CD4+TILs、CD8+TILs、Treg的分布情况,以及10例正常卵巢组织中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg的分布情况。结果显示卵巢癌组织中CD3+ TILs、CD4+ TILs、CD8+ TILs数量与正常卵巢组织中相比显著增加,且癌上皮内Treg数量增加。提示卵巢癌局部微环境中机体可对肿瘤抗原可以产生免疫反应,但Treg的存在抑制了肿瘤的特异性免疫。本研究利用免疫组织化学方法检测40例卵巢患者病理切片中癌上皮及10例正常卵巢组织中PD-L1的表达情况。结果显示PD-L1主要表达在卵巢癌上皮细胞的胞浆内或（和）胞膜上,而正常卵巢组织不表达PD-L1。同时分析卵巢癌患者PD-L1的表达与临床病理的关系,结果显示卵巢癌上皮PD-L1的表达水平与WHO组织学分级有相关性。提示肿瘤表达PD-L1诱导肿瘤免疫逃逸,其可以作为评估卵巢癌患者的预后指标。本研究收集15例卵巢癌患者腹水,进行TIL及自体肿瘤细胞的分离及培养。利用流式细胞技术检测了15例卵巢癌患者腹水中TIL淋巴细胞分型中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞以及Treg所占的比率。结果显示培养前TIL是以CD3+T淋巴细胞为主的非均一性细胞群,其中CD4+T细胞多于CD8+T细胞,Treg占（12.5±2.5）%。利用MTT法检测TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果显示诱导培养后,TIL杀伤活性显著增加。PD-L1单克隆抗体阻断后,利用MTT法检测TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性的变化,结果显示PD-L1单克隆抗体阻断后,无论是培养前还是培养后的TIL对肿瘤靶细胞的杀伤活性均显著增强。本研究证实肿瘤上皮细胞表达PD-L1,与肿瘤特异性T细胞表面的PD-1相互作用,通过诱导肿瘤特异性T细胞的凋亡而使肿瘤细胞发生免疫逃逸;而且经肿瘤抗原提呈细胞表面的T细胞受体刺激后,Treg胞浆内PD-1表达于细胞膜表面,肿瘤上皮细胞表达PD-L1与其相互作用,从而抑制了肿瘤的免疫应答。阻断PD-L1,肿瘤的特异性T细胞杀瘤效应增强,同时抑制Treg的功能。因此新的肿瘤治疗策略是在阻断PD-L1、清除Treg基础上应用肿瘤细胞疫苗,可使肿瘤免疫治疗会更加有效和完善。