论文摘要
背景和目的膀胱癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，也是我国最常见的泌尿系统恶性肿瘤，其中约90％是膀胱移行细胞癌（bladder transitional cell carcinoma，BTCC）。首次诊断BTCC时约70％～85％为浅表性肿瘤，但在行保留膀胱手术治疗的患者中约70％在第一次手术后会复发，其中约20％则会进展成具有侵袭性的高度恶性肿瘤。近年来随着对肿瘤发生分子生物学机制的深入研究，人们在BTCC的发病机制、临床诊治等方面取得大量成果，但整体治疗效果仍不理想。而BTCC的复发、侵袭和转移是影响患者预后和导致患者死亡的主要原因，因此，除了防止肿瘤发生以外，如何减少BTCC的复发、侵袭和转移就显得尤为重要，也成为目前研究的热点、重点和难点。BTCC的侵袭和转移是个涉及多阶段、多步骤、多因素、多基因的复杂过程，其中最关键的步骤是基底膜（basement membrane，BM）的破坏和细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的降解。此过程依赖多种蛋白酶系的参与，而基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）则是其中最重要的一大酶系，对促进肿瘤的侵袭和转移起着重要作用。目前至少已发现26种MMPs，其中基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）由于可以特异性的降解BM和ECM的主要成分Ⅳ型胶原，是MMPs家族中最重要的两种蛋白水解酶。MMP-2和MMP-9在正常组织中表达较低，在BTCC等恶性肿瘤组织中却呈现高表达。因此，抑制二者的活性能够抑制BTCC的侵袭和转移。RECK（reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs）基因是近年来发现的新型MMPs抑制剂，可以在转录后水平至少抑制MMP-2、MMP-9及MT1-MMP等3个MMPs家族成员的表达，从而抑制肿瘤的侵袭及转移。目前国内外关于RECK基因与BTCC关系的相关研究刚刚起步，尤其是RECK与BTCC复发关系的研究，国内外尚未见报道。本研究采用免疫组织化学方法检测RECK蛋白及MMP-2蛋白、MMP-9蛋白在BTCC组织中的表达水平，并对其与肿瘤组织学分级、病理分期、是否复发等临床病理资料之间的关系进行分析，以探讨其在BTCC的发生、发展、浸润、转移和复发过程中的作用以及三者之间的相互关系，评估其作为肿瘤标志物及临床预后指标的应用价值，为BTCC的早期诊治、预后判断及复发检测提供新的途径和理论依据，也为开发新的抗肿瘤药物提供一个新的思路。材料与方法收集郑州大学第一附属医院及第二附属医院泌尿外科2005年7月至2006年10月间经病理证实、临床资料完整的42例BTCC开放手术切除的癌组织标本或活检组织标本。其中男30例，女12例：年龄32～88岁，平均59.93±12.63岁。初发24例，复发18例。按WHO病理分级标准：Ⅰ级11例，Ⅱ级16例，Ⅲ级15例。按UICC-TNM临床分期标准：非肌层浸润性肿瘤（Tis，Ta，T1）23例，肌层浸润性肿瘤（T2～T4）19例。另收集13例正常膀胱粘膜组织标本作为对照，均取自因良性前列腺增生症行开放手术的患者，均无肿瘤病史。用SP法免疫组织化学染色技术检测BTCC癌组织及正常膀胱粘膜组织中RECK蛋白及MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表达情况；并分析RECK蛋白、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表达与BTCC患者相关临床病理参数之间的关系，包括年龄、性别、组织学分级、病理分期、是否复发等。所有数据均用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理，采用χ2检验或Fisher’s精确概率检验及Spearman等级相关分析进行阳性表达率的比较分析。以α=0.05作为统计学检验的显著性水准。结果1．RECK蛋白在正常膀胱粘膜组织中阳性表达率为84.62％（11／13），而在BTCC组织中的表达阳性率为52.38％（22／42），明显低于正常膀胱粘膜组织，差异有统计学意义（P＜0.05）；MMP-2蛋白在正常膀胱粘膜组织中阳性表达率为23.08％（3／13），而在BTCC组织中的表达阳性率为73.81％（31／42），明显高于在正常膀胱粘膜组织中的表达，两组间差异有统计学意义（P＜0．05）：MMP-9蛋白在正常膀胱粘膜组织中阳性表达率为30.77％（4／13），而在BTCC组织中的表达阳性率为85.71％（36／42），明显高于在正常膀胱粘膜组织中的表达，两组间差异有统计学意义（P＜0.05）。2．RECK蛋白在BTCC中的阳性表达率在不同年龄、性别之间无显著性差异（P＞0.05）；在高分化组（Ⅰ）RECK蛋白阳性表达率为63.64％（7／11），在中分化组（Ⅱ）为56.25％（9／16），在低分化组（Ⅲ）为40.00％（6／15），随肿瘤组织学分级的增高而明显降低。但是在高分化组（Ⅰ）和中低分化组（Ⅱ～Ⅲ）之间阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。随着BTCC临床病理分期的进展，RECK蛋白的阳性表达率呈明显下降，在非肌层浸润性BTCC（Tis，Ta，T1）为69.57％（16／23），肌层浸润性BTCC（T2～T4）为31.58％（6／19），两组间的差异有统计学意义（P＜0.05）。RECK蛋白的阳性表达率在初发肿瘤组为70.83％（17／24），在复发肿瘤组为27.78％（5／18），两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。3．MMP-2蛋白在BTCC中的表达与患者的年龄、性别无关（P＞0.05）。随肿瘤组织学分级的增高MMP-2蛋白阳性表达率明显增高，在高分化组（Ⅰ）为45.45％（5／11），在中分化组（Ⅱ）为81.25％（13／16），在低分化组（Ⅲ）为86.67％（13／15），且高分化组（Ⅰ）和中低分化组（Ⅱ～Ⅲ）之间阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。随着BTCC临床病理分期的升高，MMP-2蛋白的阳性表达率也明显上升，在非肌层浸润性BTCC（Tis，Ta，T1）为56.52％（13／23），肌层浸润性BTCC（T2～T4）为94.74％（18／19），两组间的差异有统计学意义（P＜0.05）。MMP-2蛋白的阳性表达率在初发肿瘤组为58.33％（14／24），在复发肿瘤组为94.44％（17／18），两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。4．MMP-9蛋白在BTCC中的表达与患者的年龄、性别无关（P＞0.05）。随肿瘤组织学分级的增高MMP-9蛋白阳性表达率明显增高，在高分化组（Ⅰ）为36.36％（4／11），在中分化组（Ⅱ）为87.50％（14／16），在低分化组（Ⅲ）为93.33％（14／15），且高分化组（Ⅰ）和中低分化组（Ⅱ～Ⅲ）之间阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。随着BTCC临床病理分期的升高，MMP-9蛋白的阳性表达率也呈明显上升，在非肌层浸润性BTCC（Tis，Ta，T1）为60.87％（14／23），肌层浸润性BTCC（T2～T4）为94.74％（18／19），两组间的差异有统计学意义（P＜0.05）。MMP-9蛋白的阳性表达率在初发肿瘤组为62.50％（15／24），在复发肿瘤组为94.44％（17／18），两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。5．在42例BTCC标本中，RECK蛋白表达与MMP-2蛋白表达成负相关（r=-0.460，P＜0.05），与MMP-9蛋白表达也成负相关（r=-0.309，P＜0.05）；而MMP-2蛋白表达与MMP-9蛋白表达则成正相关（r=0.557，P＜0.05）。结论1．在BTCC组织中RECK蛋白的表达出现显著性下降，而MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表达则出现显著性上调，三者共同参与了BTCC的发生和发展。2．随着BTCC组织学分级、病理分期的增高和肿瘤复发，RECK蛋白的表达明显降低，提示RECK的缺失可能使BTCC具有更强的侵袭能力，可能是BTCC发生浸润、转移和复发的重要机制，为BTCC的预防和治疗提供了一个新靶点；而MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表达却随着BTCC的组织学分级、病理分期的增高和肿瘤复发而显著上调，三者可以共同作为预测BTCC恶性程度、转移和复发潜能的重要指标。3．在BTCC组织中MMP-2蛋白的表达与MMP-9蛋白的表达成正相关，在BTCC的发生、发展中存在协同作用；而RECK蛋白的表达与MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表达成负相关，对三者的联合检测可作为反映BTCC发生、发展和预后评估的参考指标，同时也为BTCC治疗方法的研究和新的抗肿瘤药物的开发提供了一个新的思路。