彭鹏(黑龙江省中医药科学院150000)
【关键词】血液形态学检验临床分析
【中图分类号】R446.11【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）51-0151-02
1苏丹黑
1.1苏丹黑是对脂类物质进行染色，而脂类物质所包括的种类较为广泛，如中性脂肪、糖脂、磷脂和胆固醇等，脂质除构成单位膜结构外，亦具有与过氧化酶一起构成防卫功能，一般认为SB染色与POX结果相似，但因二者染色原理不同，SB较POX更敏感。所以POX染色尚不能完全替代SB染色[1]。
1.2SB染色主要应用于各种急性白血病鉴别，如与PAS染色相结合特别有助于急淋与急非淋之间的区别，比POX染色更敏感，如与免疫表型检测有助于M0、M1、M5a等急性白血病的鉴别。慢性粒细胞性白血病可见反应减弱；何杰金病可见阳性减弱；恶性贫血呈阳性减弱；高雪细胞呈弱阳性；尼曼－匹克细胞呈中等阳性。再生障碍性贫血时阳性增多。
1.3注意事项
1.3.1本实验是测定胞浆内的含脂类物质，故陈旧涂片也可使用。
1.3.2为避免部分脂肪溶解，涂片在染色前勿沾上丙酮、乙醚、氯仿等溶剂。
1.3.3苯酚极易潮解，称量非常困难，可将石炭酸先置60℃水浴溶化，再用烧杯称取16g，但慎防苯酚烧伤皮肤。
1.3.4苏丹黑B贮存液为无水乙醇所配，易挥发，所以容器封闭性能要好，并置4℃冰箱保存。
1.3.5缓冲液配置后为乳白色混合液，静置后会产生上下分层现象，但在临用前混匀即可，对结果无影响。
1.3.6复染如采用瑞氏染色液可与POX染色相结合观察结果，但此染色的复染要求时间较长，一般室温需染20～30分钟，冬天可适当延长。
2中性粒细胞碱性磷酸酶
2.1非特异性酯酶由于具有较多的同工酶，且不同种类的细胞内存有的同工酶也不尽相同，所以此类酶除了在单核－巨噬系统反应较强烈以外，其它细胞系统也可呈现出不同程度的阳性，所以对细胞中非特异性酯酶如能组合检测比单一检测更具价值和意义。非特异性染色的主要意义在于结合细胞形态，结合细胞免疫表型检测，为临床急性非淋巴细胞性白血病的分型和亚型确定提供重要的依据。
2.2α－醋酸荼酚酯酶因主要存在于单核细胞中，且为同工酶4、5，而中性粒细胞含有的同工酶为1、2、7、9，由于一定浓度的氟化钠能完全抑制酯酶3、5、6，此特点在对急性髓性白血病中M2、M4、M5等的分型和亚型分类有一定参考价值。另由于巨核细胞此酶也可呈阳性反应，如结合酸性磷酸酶染色(ACP)和免疫表型检测，可对AML－M7作出诊断[2]。
2.3α－丁酸荼酚酯酶(α－NBE)在单核－巨噬细胞系统中反应强烈，亦被视作单核－巨噬细胞系统所特有的标志酶，同时此反应也能被NaF所抑制，在急性粒细胞性白血病中，M3可出现强阳性，但不被氟化钠所抑制。
2.4注意事项
2.4.1酶的活性随标本采集后的时间而逐步下降，如无法立即染色，应先固定，否则将影响阳性结果。
2.4.2涂片固定方法较多，但液体固定法比蒸气固定法背景清晰，不易脱膜。
2.4.3各种基质试剂由于其产品衍生物较多，许多型号均可使用，使染色效果可随产地、生产厂商及不同批号等因素相差甚远，所以每次操作应设阴、阳性对照。
2.4.4重氮盐的选择需根据酶反应中与基质的最佳配伍而定，以提高阳性率和阳性强度。
2.4.5氟化钠的称量要求较高，为避免每次使用称量差异，可将氟化钠配制成一定浓度水溶液，使用时吸取即可。
2.4.6由于方法学关系，各地使用的基质液浓度差异较大，但在酯酶染色反应中切忌基质浓度过高，以防引起背景污染，冲洗困难，特别在冬天，易使涂片表面产生脂质沉淀，影响结果观察。
3细胞内酸性磷酸酶
3.1酸性磷酸酶广泛存在于人体组织细胞内，其最适pH为4.5～5.5左右，酸性磷酸酶通常存在于溶酶体内，其同工酶有七种，亦可存在于内质网和高尔基体内。其中同工酶5对L(+)酒石酸不敏感，在大部分血细胞内均存在酶活性，如粒细胞、T－淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞及单核－吞噬细胞系统的细胞。
3.2酸性磷酸酶在T－淋巴细胞异常增多时都具较强的活性，特别在急性T－淋巴细胞白血病时最为显著，但对L(+)酒石酸敏感受其抑制，在B－淋巴细胞异常增生时，多数为阴性或弱阳性反应。而多毛细胞性白血病可呈较强的阳性反应，且不被L(+)酒石酸所抑制，因含独特的同工酶5，所以酸性磷酸酶对多毛细胞白血病的诊断具重要价值。
3.3在急性非淋巴细胞白血病中，单核细胞系统反应比粒系细胞系统较强。多发性骨髓瘤细胞、浆细胞均可呈强阳性反应。另对高－雪细胞和尼曼达克细胞的鉴别有较重要价值，通常高－雪细胞呈强阳性反应而尼曼达克细胞呈阴性反应。
3.4ACP与其他检测结合的意义
3.4.1结合电镜超微结构检查，可对多毛细胞性白血病作出诊断。
3.4.2结合细胞免疫表型检测，有助于区别各种B－细胞克隆增生性疾病，如慢淋与毛白、B－ALL与毛白。
3.4.3结合其它细胞化学染色，有助于对急性粒－单细胞白血病亚型的分类。
3.5注意事项
3.5.1血液细胞内的酸性磷酸酶其反应最佳pH值在5左右，由于方法学的不同，最后工作液的配置须用酸度计进行测定，以免阳性强度受影响，甚至无阳性出现。
3.5.2由于含酸性磷酸酶的血液细胞有许多，且各种细胞所含ACP同工酶不同，即同一基质可有阳性程度的差异，反之，在同一细胞可因基质不同而使阳性结果存在明显差异，特别在不同的实验室之间尤为突出。
3.5.3常用的基质液目前国内尚无，基本为进口产品，因不同的国家和生产厂商及衍生物等因素，在使用时应作阴、阳性对照。
3.5.4ACP染色结果以弥散状阳性出现的细胞较多，如为弱阳性反应，在复染时应注意在涂片纵向复染一半，另一半不复染以利弱阳性的观察。
参考文献
[1]卢兴国;丛玉隆.应重视和提升传统血液形态学检验诊断水平[J];中华检验医学杂志;2006年06期
[2]卢兴国.完善血液形态学诊断的模式[J];实用医技杂志;2003年09期