临床分离肺炎克雷伯菌产质粒介导AmpC酶的研究

论文摘要

目的:对临床分离肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶以及耐药性进行检测,尤其是对肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶的检测,了解本地区肺炎克雷伯菌中AmpC酶耐药基因型的流行情况和耐药性变化,为临床抗感染治疗以及医院感染的监测和控制提供循证医学依据。对肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶检测方法进行评价分析,探讨在临床实验室中建立一种及时、准确的AmpC酶检测方法。方法:收集2006年09月至2007年08月我院临床分离各类标本,经法国BioMerieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定仪进行鉴定为肺炎克雷伯菌共137株（同一患者同类标本分离菌株不重复计入）,并同时进行MIC值测定。采用头孢西丁纸片琼脂法（K-B法）进行筛选,以及应用头孢西丁三维试验、CLSI推荐的ESBLs确证试验分别进行AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的表型检测。同时根据苯基代硼酸对AmpC酶的抑制作用采用双纸片协同增效试验检测AmpC酶。应用PCR技术检测ESBLs和AmpC酶耐药基因并对扩增产物进行测序确定其基因型。结果:在137株临床分离肺炎克雷伯菌中,经头孢西丁纸片琼脂扩散试验筛选,对头孢西丁不敏感的菌株共有22株（抑菌圈直径≤17mm）,阳性率为16.1%（22株/137株）;ESBLs确证试验阳性菌株共有51株,阳性率为37.2%（51株/137株）;头孢西丁三维试验阳性菌株共有11株,阳性率为8.0%（11株/137株）;双纸片抑制增效试验中,FOX和FOX/PBA纸片组合阳性菌株18株,阳性率为13.1%（18株/137株）,CTT和CTT/PBA纸片组合阳性菌株11株,阳性率为8.0%（11株/137株）。在22株对头孢西丁不敏感的临床分离肺炎克雷伯菌中,多重PCR扩增AmpC酶基因经电泳及凝胶成像分析,扩增阳性菌株有19株,阳性率为13.9%（19株/137株）;ESBLs基因PCR扩增结果为TEM型阳性有10株,阳性率为45.5%（10株/22株）;SHV型阳性有6株,阳性率为27.3%（6株/22株）;CTX-M型有6株,阳性率为27.3%（6株/22株）。其中,有1株同时携带4种β-内酰胺酶耐药基因,有6株同时携带3种β-内酰胺酶耐药基因,有5株同时携带2种β-内酰胺酶耐药基因,携带2种及2种以上共有12株（54.5%）,而携带AmpC酶耐药基因的肺炎克雷伯菌同时携带ESBLs耐药基因达63.2%（12株/19株）。AmpC酶基因扩增产物经回收测序,其结果与GenBank数据库对比,均为DHA-1型AmpC酶。头孢西丁三维试验阳性结果与PCR结果符合率为47.4%（9株/19株）,双纸片抑制增效试验中,CTT/CTT+PBA纸片组阳性结果与PCR结果符合率为57.9%（11株/19株）;FOX/FOX+PBA纸片组阳性结果与PCR结果符合率为94.7%（18株/19株）。根据产ESBLs确认试验和头孢西丁三维试验的检测结果（见表1）,对137株肺炎克雷伯菌分成ESBLs（-） AmpC（-）、ESBLs（+） AmpC（-）、ESBLs（-） AmpC（+）和ESBLs（+） AmpC（+） 4种模式。其中,对头孢唑啉、头孢曲松、安曲南、头孢他啶和头孢吡肟的耐药率,ESBLs（+） AmpC（-）和ESBLs（+） AmpC（+）模式均为100%,ESBLs（-） AmpC（+）模式分别为100%、100%、75%、75%和25%。对头孢替坦、氨苄西林/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率,ESBLs（+） AmpC（-）模式分别为0%（0株/51株）、68.2%（30株/44株）和4.5%（2株/44株）,ESBLs（-） AmpC（+）模式分别为25.0%（1株/4株）、100%（4株/4株）和50.0%（2株/4株）,ESBLs（+） AmpC（+）模式分别为42.9%（3株/7株）、100.0%（7株/7株）和28.6%（2株/7株）。对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方新诺明的耐药率,ESBLs（+）模式分别为43.1%（22株/51株）、39.2%（20株/51株）、33.3%（17株/51株）和47.1%（24株/51株）,AmpC（+）模式分别为54.5%（6株/11株）、72.7%（8株/11株）、63.6%（7株/11株）和81.8%（9株/11株）。四种模式对亚胺培南和厄它培南的耐药率最低,均为0%。结论:产AmpC酶的肺炎克雷伯菌耐药谱进一步扩大,而且产酶菌常携带2种或以上的耐药基因,表现出多重耐药性,但仍对亚胺培南敏感。以苯基代硼酸抑制剂为基础的双纸片增效试验作为质粒介导AmpC酶的检测方法,尤其是FOX/FOX+PBA复合纸片值得在临床实验室推广和应用。目前,我院临床分离肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶以DHA-1基因型流行为主。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 论文正文
• 前言
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 结果
• 1 肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的表型检测
• 2 肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的耐药性检测结果
• 3 肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的基因型检测结果
• 4 肺炎克雷伯菌AmpC 酶检测方法比较结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 在学期间完成的论文