参夏合剂对培养血管平滑肌和动脉粥样硬化斑块细胞凋亡的影响

论文摘要

动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种细胞凋亡不足与过度并存的病理现象,在AS后期以细胞凋亡为主,尤其是AS斑块内的细胞凋亡明显增加,从而易于导致AS斑块的不稳定,引起急性的心脑血管病的突发事件。本研究旨在运用中医思维方式从理论及实验两方面,对动脉平滑肌细胞凋亡和AS的病因、病机和治法方药进行系统的研究和探讨。研究认为气虚、痰浊、血瘀和热毒是AS的主要病因病机,据此拟订了补气化痰活血解毒的中药参夏合剂,观察了参夏合剂对培养动脉平滑肌细胞的凋亡和AS斑块处的细胞凋亡的作用。研究方法:1.建立以血管紧张素-Ⅱ（Ang-Ⅱ）诱导的培养血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的模型,检测参夏合剂对VSMC凋亡的影响以及VSMC的Caspase-3表达的影响。2.整体实验观察参夏合剂对高脂饲料所建立的大鼠AS模型的主动脉AS斑块处细胞凋亡、Bax、Bcl-2表达的影响以及血脂的影响。结果:1.参夏合剂低剂量组的大鼠动脉平滑肌培养细胞的凋亡率明显少于模型组（P<0.05）、非常明显少于红花对照组（P<0.01）;参夏合剂高剂量组的细胞凋亡率则非常明显低于模型组和红花对照组（P<0.01,P<0.01）。2.参夏合剂高、低剂量组大鼠动脉平滑肌培养细胞的Caspase-3蛋白表达量均明显低于模型组和红花对照组（P<0.05,P<0.05）。3.病理切片显示:模型组大鼠主动脉壁可见典型动脉粥样硬化的病理改变,其粥样硬化斑块中含有胆固醇结晶。参夏合剂组大鼠的光镜下病理改变类似模型组,但病变程度较模型组轻,且未见到斑块内含有胆固醇结晶。4.参夏合剂组的大鼠主动脉AS斑块处Bax蛋白表达量显著低于模型组（P<0.05）。参夏合剂组的大鼠主动脉AS斑块处Bcl-2蛋白表达量同模型组相比无显著性差异（P>0.05）。5.参夏合剂组的大鼠主动脉AS斑块处平滑肌细胞凋亡阳性率非常明显低于模型组（P<0.01）。6.与模型组比较,参夏合剂可以很明显减低实验性动脉粥样硬化大鼠的血清的TG、TC和LDL-CH水平（P<0.01）,非常明显升高ApoA.水平（P<0.01）。通过本实验可以认为:参夏合剂对于因为血管紧张素-Ⅱ所导致的细胞凋亡有明显的抑制作用,可以明显减少AS斑块处的细胞凋亡,并可以降低血脂。其减少细胞凋亡的机制可能是通过抑制细胞凋亡的两个重要转导信号Caspase-3、Bax的表达而起作用。参夏合剂可能对稳定AS的粥样硬化斑块,减少心脑血管病的突发事件有重要的临床应用价值。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 实验一 参夏合剂对培养大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的TUNEL 实验
• 一、实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 实验用药
• （三） 实验仪器
• （四） 主要试剂
• （五） 部分试剂配制
• 二、实验方法
• （一） 大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养（组织贴块法）
• （二） 培养细胞的生长和传代
• （三） 动脉平滑肌细胞的鉴定
• （四） 参夏合剂对经ANGⅡ诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的作用
• 三、结果
• （一） 结果判定
• （二） 结果
• 实验二 参夏合剂对培养大鼠动脉平滑肌细胞CASPASE-3 表达的影响
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• （一） 大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养
• （二） 培养细胞的生长和传代
• （三） 动脉平滑肌细胞的鉴定
• （四） 参夏合剂对经ANGⅡ诱导大鼠血管平滑肌细胞的CASPASE-3 的作用
• 三、结果
• （一） 结果判定
• （二） 结果
• 实验三 参夏合剂对实验性动脉粥样硬化大鼠主动脉组织形态和平滑肌细胞BAX、BCL-2 的影响
• 一、实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 实验用药
• （三） 实验仪器
• （四） 主要试剂
• 二、实验方法
• （一） 分组
• （二） 造模方法和给药方法
• （三） 大鼠主动脉的HE 染色
• （四） 大鼠主动脉 BCL-2、BAX 免疫组化测定
• （五） 统计学分析
• 三、结果
• （一） 结果判定
• （二） 结果
• 实验四 对实验性动脉粥样硬化大鼠主动脉平滑肌细胞的凋亡的TUNEL 实验
• 一、实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 实验用药
• 二、实验方法
• （一） 分组
• （二） 造模方法和给药方法
• （三） 主动脉平滑肌细胞的TUNEL 检测
• （四） 统计学分析
• 三、结果
• （一） 结果判定
• （二） 结果
• 实验五 对实验性动脉粥样硬化大鼠的血脂的影响
• 一、实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 实验用药
• （三） 实验药品
• 二、实验方法
• （一） 分组
• （二） 造模方法和给药方法
• （三） 血脂检测
• （四） 统计学分析
• 三、结果
• （一） 各组大鼠TG 水平显示
• （二） 各组大鼠TC 水平显示
• （三） 各组大鼠HDL-CH 水平显示
• （四） 各组大鼠LDL-CH 水平显示
• （五） 各组大鼠APOA 水平显示
• （六） 各组大鼠APOB 水平比较
• 讨论
• 一、AS 的病因病机探讨
• （一） 心、肺、脾、肾脏虚损以及肝失疏泄是AS 发生的根本
• （二） 痰浊、血瘀、热毒是动脉粥样硬化的关键病理因素
• 二、动脉粥样硬化治法探讨——补气活血化痰解毒为AS 的根本治法
• 三、补气活血化痰解毒为参夏合剂的功效
• （一） 物组成和功效
• （二） 方药分析
• （三） 用药特色
• （四） 现代药理研究
• 四、参夏合剂作用机理分析
• （一） 参夏合剂抑制培养大鼠动脉平滑肌细胞凋亡的作用机理分析
• （二） 参夏合剂对实验性动脉粥样硬化大鼠主动脉组织形态和平滑肌细胞BAX、BCL-2 的影响的作用机理分析
• （三） 参夏合剂抑制实验性动脉粥样硬化大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的作用机理分析
• （四） 参夏合剂对实验性动脉粥样硬化大鼠的血脂的影响的作用机理分析
• 结语
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 致谢
• 详细摘要