MicroRNA-146a在重症肌无力中的作用研究

论文摘要

目的：检测MG患者PBMCs中miRNA-146a的表达水平；研究抑制miRNA-146a后对Torpedo AchR α146-162（Tα）肽段刺激后的小鼠AchR特异性B细胞活化的影响及可能机制,探讨miRNA-146a在MG中的作用,寻找抑制MG中AchR特异性免疫反应的治疗新方法。方法：以荧光定量PCR检测MG患者组及健康对照组PBMCs中miR-146a的表达水平。合成miR-146a的反义互补链AntagomiR-146a片段作为抑制剂,并以结构相似的无意义片段作为对照物；免疫磁珠分选小鼠脾脏B、T细胞并测定细胞纯度及活性；脂质体HiPerFect负载FITC标记的AntagomiR-146a转染B细胞,流式细胞术检测转染效率；设置空白组、Tα组、Tα+抑制剂组、Tα+对照组,将T、B细胞按照1：3比例共培养2天后,除空白组外均予以Tα刺激,同时Tα+抑制剂组予以AntagomiR-146a、Tα+对照组予以对照物干预。干预后第3天分选B细胞,荧光定量PCR检测miR146a的表达水平、流式检测细胞表面标志CD40、CD80、CD86的表达水平；Western Blot检测TLR4、NF-κB及Bcl-2的表达水平。结果：1.MG患者组较健康对照组PBMCs中miR-146a的表达水平显著增高（p=0.004）。2.分选后B、T细胞纯度分别为97.1%、96.7%,增殖反应示细胞活性正常,脂质体HiPerFect负载AntagomiR-146a转染B细胞的结合率达65.8%,满足实验要求。3.Tα组较空白组B细胞miR-146a表达水平显著增高（p<0.001）；Tα+抑制剂组较Tα组miR-146a表达水平显著降低（p<0.001）；Tα+对照组与Tα组miR-146a表达水平差异无统计学意义（p=0.948）。4.Tα组较空白组B细胞CD40、CD80、CD86表达水平显著增高；Tα+抑制剂组较Tα组CD40、CD80表达水平显著降低,CD86表达无明显差异；Tα+对照组与Tα组CD40、CD80及CD86表达水平无明显差异。5.Tα组较空白组B细胞TLR4、NF-κB表达水平显著增高（p<0.001）；Tα+抑制剂组较Tα组TLR4、NF-κB表达水平显著降低（p<0.001）；Tα+对照组TLR4、NF-κB表达水平及各组间Bcl-2表达水平差异无统计学意义（p>0.05）。结论：1.MG患者PBMCs中miR-146a的表达水平较健康人显著增高。2.MiR-146a可能参与调控AchR特异性B细胞的活化过程,介导MG的发病。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 縮略词说明
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验流程
• 1.2 实验材料
• 1.3 实验方法
• 1.4 数据分析及处理
• 第二章 结果
• 2.1 MG患者PBMCs中miR-146a的表达水平
• 2.2 分选后所得细胞纯度及活性、抑制剂转染效率
• 2.3 小鼠B细胞中miR-146a的表达水平
• 2.4 小鼠B细胞表面CD40、CD80、CD86的表达水平
• 2.5 小鼠B细胞中TLR4、NF-κB及Bcl-2蛋白的表达水平
• 第三章 讨论
• 3.1 MG患者PBMCs中miRNA-146a的表达水平增高
• 3.2 MiR-146a对AchR特异性B细胞的作用
• 3.3 MiR-146a调控AchR特异性B细胞TLR4/NF-κB信号通路的可能机制
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢