首页> 正文

CRAd.pEgr1-Smac联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应

2020-12-11阅读(295)

CRAd.pEgr1-Smac联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应

论文摘要

放射治疗是肿瘤治疗的重要的手段之一,但由于肿瘤临近部位正常组织的放射损伤和某些肿瘤的辐射抗拒性等问题,严重地影响着放疗的疗效和应用。肿瘤基因治疗是近年来新兴的一种肿瘤治疗技术,为肿瘤的彻底治愈带来了可能,但由于基因转导系统的低靶向性和治疗基因表达的不可控性,使基因治疗这把双刃剑尚不能替代传统的肿瘤治疗方法。肿瘤作为一种全身性疾病,其发生发展是一多因素、多步骤和多阶段的复杂过程,单一疗法往往难以取得满意疗效,肿瘤的综合治疗势在必行。肿瘤基因-放射治疗的提出为弥补放射治疗与基因治疗各自的弊端带来了可能,通过将辐射诱导性基因的调控序列与肿瘤杀伤基因相偶联,转染或感染肿瘤细胞后,在对肿瘤实施局部放疗的同时诱导肿瘤杀伤基因表达的增强,产生辐射和基因表达产物的协同抑瘤作用。该疗法一方面将放疗与基因治疗有机地结合,发挥协同作用；另一方面,由于辐射具有靶向性和可控性,实现了对杀伤基因表达的时空调控。利用具有肿瘤细胞靶向性的条件复制型腺病毒作为基因治疗的载体,提高治疗基因对肿瘤细胞的靶向性；利用Egr-1启动子在电离辐射诱导下可启动其下游基因表达的特性,提高治疗基因表达的可控性。本实验构建了对肿瘤细胞具有双重靶向的重组腺病毒质粒pAd.Egr1-Smac-hTert-E1A（CR2）-E1Bp-E1B55K,并在HEK293细胞内包装成携带Egr-1启动子和Smac基因的条件复制型腺病毒CRAd.pEgr1-Smac,研究其在x射线诱导下对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响,以及CRAd.pEgr1-Smac联合照射对MDA-MB-231细胞中凋亡相关基因mRNA及蛋白水平表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。实验结果表明,CRAd.pEgrl-Smac联合照射对MDA-MB-231细胞具有明显的增殖抑制和促凋亡作用,同时伴有细胞中Smac、Cyt c、caspase-9和-3 mRNA及其蛋白表达增高。这些结果提示,CRAd.pEgr1-Smac联合照射抑制MDA-MB-231肿瘤细胞增殖的促凋亡机制,涉及线粒体途径的Smac、Cyt c、caspase-9和-3的相互作用。本研究为提高肿瘤基因治疗靶向性、可控性及放射治疗的有效性,将基因-放射治疗有机地联合应用,为肿瘤基因-放射治疗的临床应用提供实验依据,为肿瘤综合治疗提供了新的思路。

论文目录

  • 内容提要
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 第1章 绪论
  • 1.1 基因治疗的研究进展及发展前景
  • 1.1.1 基因治疗的定义及应用
  • 1.1.2 基因治疗面临的技术问题和挑战
  • 1.1.3 基因治疗导入系统研究进展
  • 1.1.4 基因治疗的前景展望
  • 1.2 肿瘤基因治疗研究进展
  • 1.2.1 肿瘤基因治疗原理及分类
  • 1.2.2 肿瘤基因治疗面临的挑战
  • 1.3 溶瘤腺病毒与肿瘤治疗
  • 1.3.1 腺病毒基本特性
  • 1.3.2 腺病毒载体的发展
  • 1.3.3 条件复制型腺病毒载体
  • 1.3.4 条件复制型腺病毒与肿瘤治疗
  • 1.4 肿瘤基因-放射治疗
  • 1.4.1 肿瘤基因-放射治疗种类
  • 1.4.2 肿瘤基因放射治疗的辐射增敏机制
  • 1.4.3 Egr-1介导的肿瘤基因-放射治疗研究进展
  • 1.5 Smac基因与肿瘤
  • 1.5.1 Smac的分子特性及结构特征
  • 1.5.2 Smac的促凋亡作用
  • 1.5.3 Smac与肿瘤的关系
  • 1.5.4 Smac的研究前景
  • 1.6 立题依据
  • 第2章 材料与方法
  • 2.1 主要试剂及器材
  • 2.1.1 试剂
  • 2.1.2 器材
  • 2.2 主要仪器
  • 2.3 质粒与菌株
  • 2.4 细胞株
  • 2.5 照射条件
  • 2.6 细胞生物学实验方法
  • 2.6.1 培养液配制
  • 2.6.2 胎牛血清制备
  • 2.6.3 D-Hanks液的配制
  • 2.6.4 胰酶的配制
  • 2.6.5 细胞培养
  • 2.6.6 细胞冻存
  • 2.6.7 细胞复苏
  • 2.6.8 敏感肿瘤细胞株筛选
  • 2.6.9 细胞增殖检测
  • 2.6.10 细胞凋亡检测
  • 2.6.11 细胞mRNA表达水平检测
  • 2.6.12 细胞蛋白表达水平检测
  • 2.7 分子生物学实验方法
  • 2.7.1 细菌培养技术
  • 2.7.2 重组穿梭载体的构建
  • 2.7.3 重组腺病毒的包装与鉴定
  • 2.7.4 目的基因表达
  • 2.8 统计学方法
  • 第3章 实验结果
  • 3.1 重组质粒的构建及鉴定
  • 3.1.1 目的基因的获得
  • 3.1.2 重组质粒的构建及鉴定
  • 3.2 重组腺病毒的包装及鉴定
  • 3.2.1 重组腺病毒质粒构建
  • 3.2.2 重组腺病毒包装
  • 3.2.3 重组腺病毒扩增
  • 3.2.4 重组腺病毒滴度测定
  • 3.2.5 重组腺病毒鉴定
  • 3.3 重组腺病毒联合照射的敏感肿瘤细胞株筛选
  • 3.4 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应
  • 3.4.1 重组腺病毒对MDA-MB-231细胞增殖的影响
  • 3.4.2 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用
  • 3.4.3 重组腺病毒联合2.0Gy照射对MDA-MB-231细胞凋亡的影响
  • 3.5 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中凋亡相关基因表达的影响
  • 3.5.1 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中Smac、Cyt c、caspase-9和-3mRNA表达的影响
  • 3.5.2 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中Smac、Cyt c、caspase-9和-3蛋白表达的影响
  • 第4章 讨论
  • 4.1 目的基因的获得
  • 4.1.1 E1A-E1Bp和E1B55K基因的克隆
  • 4.1.2 hTert启动子的克隆
  • 4.1.3 Smac基因的克隆
  • 4.1.4 Egr-1启动子的克隆
  • 4.2 条件复制型腺病毒质粒的构建及病毒的包装鉴定
  • 4.2.1 重组腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定
  • 4.2.2 细菌内同源重组
  • 4.2.3 重组腺病毒包装、滴度测定及鉴定
  • 4.3 重组腺病毒联合照射的敏感肿瘤细胞株筛选
  • 4.4 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应
  • 4.4.1 重组腺病毒对MDA-MB-231肿瘤细胞增殖的影响
  • 4.4.2 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞生长抑制的剂量效应
  • 4.4.3 重组腺病毒联合2.0Gy照射对MDA-MB-231细胞生长抑制的时程效应
  • 4.4.4 重组腺病毒联合2.0Gy照射对MDA-MB-231细胞凋亡的影响
  • 4.5 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中凋亡相关基因表达的影响
  • 4.5.1 mRNA表达的变化
  • 4.5.2 蛋白表达的变化
  • 结论
  • 参考文献
  • 攻博期间发表的学术论文及其他成果
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].山茱萸提取物对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和转移的抑制作用及机制研究[J]. 浙江中西医结合杂志 2020(05)
    • [2].飞燕草素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解的影响[J]. 食品工业科技 2020(20)
    • [3].瘦素调控乳腺癌MDA-MB-231细胞周期进程的研究[J]. 沈阳医学院学报 2016(06)
    • [4].参芪扶正注射液通过肿瘤相关巨噬细胞提高人乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂的敏感性[J]. 中国实验方剂学杂志 2020(04)
    • [5].蒲公英提取物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导凋亡的实验研究[J]. 实用中医内科杂志 2020(06)
    • [6].茯苓酸通过激活多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡[J]. 中草药 2016(21)
    • [7].农吉利碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及相关因子表达的影响[J]. 中药药理与临床 2016(06)
    • [8].罗勒多糖对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭的影响[J]. 山东大学学报(医学版) 2013(09)
    • [9].白花丹醌对人乳腺癌细胞mda-mb-231的体外效应[J]. 华西药学杂志 2008(01)
    • [10].艾迪注射液对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤作用研究[J]. 中南药学 2020(07)
    • [11].小檗碱药理作用对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响[J]. 社区医学杂志 2016(17)
    • [12].黄连碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞周期和增殖的作用及其机制[J]. 江苏医药 2015(09)
    • [13].盐酸小檗碱抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及诱导凋亡的作用研究[J]. 南京医科大学学报(自然科学版) 2013(09)
    • [14].塞来昔布对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、侵袭及黏附性的影响[J]. 中国癌症杂志 2011(04)
    • [15].比卡鲁胺对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡的影响[J]. 中国当代医药 2019(36)
    • [16].余甘子对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及分子机制[J]. 中国高原医学与生物学杂志 2020(01)
    • [17].冬凌草甲素诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及对细胞内活性氧水平的影响[J]. 中国中药杂志 2017(12)
    • [18].莲心碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬功能的影响[J]. 第三军医大学学报 2015(07)
    • [19].川楝素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用[J]. 江苏医药 2015(11)
    • [20].三氧化二砷对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响[J]. 安徽医药 2013(06)
    • [21].莪术油通过诱导细胞凋亡抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖[J]. 西部医学 2011(05)
    • [22].黄芩苷诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡作用的研究[J]. 安徽中医学院学报 2008(02)
    • [23].瘦素诱导乳腺癌三阴细胞系MDA-MB-231侵袭的形态学观察[J]. 沈阳医学院学报 2016(04)
    • [24].莪术醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭能力的影响[J]. 广东医学 2013(12)
    • [25].姜黄素对转化生长因子-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9表达及其侵袭能力的影响[J]. 中国生物制品学杂志 2012(10)
    • [26].雌马酚通过抑制核转录因子-κB表达水平诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡[J]. 卫生研究 2011(01)
    • [27].MDA-MB-231乳腺癌细胞两种低氧模型的建立与比较分析[J]. 中国病理生理杂志 2020(02)
    • [28].己酮可可碱和辛伐他汀对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的促进作用[J]. 中国临床药理学杂志 2020(18)
    • [29].虫草素对MDA-MB-231细胞增殖及细胞凋亡的影响[J]. 中国现代医学杂志 2015(08)
    • [30].姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的抑制作用[J]. 中国生物制品学杂志 2013(11)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  

    CRAd.pEgr1-Smac联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5