（1上海市第七人民医院泌尿外科上海200137）
（2上海市第七人民医院病理科上海200137）
【摘要】目的：探讨谷胱甘肽S转移酶（GSTP1）在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测40例前列腺癌组织及42例前列腺增生组织中GSTP1的表达，分析GSTP1的表达与Gleason分级之间的关系。结果：GSTP1在前列腺增生组织中为高表达，40例前列腺癌组织中GSTP1表达率在高、中、低分化癌中分别为58.3%、20.0%、16.7%，呈下降趋势，2组GSTP1表达差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：GSTP1表达缺失和4-HNE的高表达，可能在前列腺癌的进展中起重要作用。
【关键词】前列腺肿瘤；谷胱甘肽S转移酶；四羟基壬烯；免疫组织化学
【中图分类号】R737.25【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）08-0218-02
前列腺癌在我国的发病率呈显著上升趋势，其中部分前列腺癌患者逐渐产生激素耐受而转为去势抵抗型前列腺癌。对于去势抵抗型前列腺癌的发生机制目前尚未明了。谷胱甘肽S转移酶（glutathioneS-transferases，GSTs）为还原4-HNE、调控其细胞内水平的主要酶[1]。本研究通过比较前列腺癌患者、前列腺增生患者前列腺癌组织中GSTP1的表达情况，来初步评价其在前列腺癌发生机制中的作用及临床意义。
1.资料与方法
1.1一般资料
取自我院2013年10月至2016年2月收治的前列腺癌患者40例，其中前列腺癌切除标本15例，经尿道电切标本6例，穿刺活检组织标本19例。年龄61～86岁，平均年龄72岁。病理分级：根据Gleason评分标准分为高分化腺癌12例（Gleason评分2～4分），中分化腺癌10例（Gleason评分5-7分），低分化腺癌18例（Gleason评分8～10分）；42例同期手术切除的前列腺增生患者标本作为对照，年龄63～81岁，平均年龄69岁。
1.2方法
鼠抗人GSTP1单克隆抗体为美国抗体公司产品。每例标本石蜡连续切片3张，片厚4μm，一张常规HE染色，另二张分别作GSTP1和4-HNE抗原免疫组化染色。切片脱蜡和水化后，PBS（磷酸缓冲液，PH＝7.4）冲洗三次，每次2分钟（3×2＇）。每张切片加50μl过氧化物酶阻断溶液，以阻断内源性过氧化物酶活性，室温下孵育10分钟。切片放入盛有0.01mol/L，PBS溶液的容器中置微波炉中高档（600W）至沸腾，换2档（200W）微沸10分钟。PBS冲洗3×2＇。每张切片加50μl第一抗体（鼠抗人GSTP1单克隆抗体,效价均为1：20）室温放置60分钟。PBS冲洗3×2＇。每张切片加50μl检测试剂，室温放置30分钟。PBS冲洗3×2＇。每张切片加50μlEnVisionTM，室温下孵育10分钟。PBS冲洗3×2＇。每张切片加100μl新配制的DAB（联苯二胺）溶液显色10分钟。自来水充分冲洗，苏木素浅染，自来水冲洗还蓝，梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。用PBS代替一抗作阴性对照，已知前列腺癌阳性切片作阳性对照。结果判定采用双盲法，每张切片由2名病理科医师分别判断。每张切片选取5个具有代表性的高倍视野，计数500个细胞中的阳性细胞数，以阳性细胞数＜10%为为阴性表达，计0分；阳性细胞数≥10%为为阳性表达，按≥10%，<25%计1分、≥25%，<50%计2分、≥50%，<75%计3分、≥75%计4分。阳性细胞占细胞总数的75%以上视为高表达。
1.3统计学处理
应用SPSS18.0进行分析。采用采用秩和检验比较前列腺癌与前列腺增生组织中GSTP1的阳性表达率，显著性检验水平α=0.05。
2.结果
GSTP1在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达情况
结果显示，GSTP1在前列腺增生组织的细胞质和细胞核内高表达。12例高分化前列腺癌组织中GSTP1有4例为高表达，达4分；GSTP1在高、中、低分化癌中阳性表达率分别为58.3%、20.0%、16.7%，呈下降趋势。2组中GSTP1表达差异有统计学意义（P＜0.01）。（表1）
3.讨论
去势抵抗性前列腺癌发生机制目前尚未明了，对于其发生机制，目前有许多假说，但均无法对其作出全面解释，近年来，雄激素受体表达的旁路调节机制渐受重视。研究表明，细胞促有丝分裂蛋白激酶（MAPK）和（AKT）作为重要的细胞信号传导分子可使前列腺癌细胞雄激素受体磷酸化后对双氢睾酮敏感性明显增强，并可促使其信号传导入细胞核从而促进细胞生长。MAPK在去势抵抗性前列腺癌中表达明显增加，并与前列腺癌分期、分级呈正相关[2]。激素敏感型前列腺癌细胞转染Ras基因可致MAPK激活及高表达从而导致激素逃逸的发生。在激素不敏感型前列腺癌细胞中AKT活性亦明显增加，并可通过雄激素受体磷酸化而促其信号传导入核[3]。四羟基壬烯（4-hydroxynonenal，4-HNE）作为人体内重要的氧化应激终产物对细胞分化、增殖及凋亡起调控作用。进一步研究表明4-HNE可促使MAPK及AKT高表达，4-HNE可能为前列腺癌细胞增殖及激素逃逸发生的重要调控物质［4］。人体组织中，谷胱甘肽S转移酶（GST）及其同工酶为主要的抗氧化酶类，根据其不同特性，主要分为α、μ、π、θ四大类，不同组织中它们的分布各不相同。hGSTA4为还原4-HNE、调控其细胞内水平的主要酶[4]。近年来在不同人种中进行流行病学研究均发现不同类别的GST低表达与前列腺癌发生的危险性呈正相关。本研究中，GSTP1通过参与细胞的新陈代谢、解毒及清除可能损害基因的外源性化合物，从而保护细胞免受DNA损伤和癌变。杜稳斌等[5]报道，超过90%的前列腺癌组织中GSTP1的CpG岛存在高甲基化现象，而正常人和前列腺增生症患者的前列腺组织中未发现。在本研究中，GSTP1在40例前列腺癌组织中表达率情况为：高分化腺癌58.3%，中分化腺癌20.0%，低分化腺癌16.7%，12例高分化前列腺癌组织中GSTP1有4例为高表达，达4分。在42例前列腺增生组织中表达率为92.9%，两者之间的差异有统计学意义（P＜0.01），且GSTP1的不同表达率间Gleason分级差异有统计学意义（P＜0.01）。进一步研究还发现且GSTP1的表达和4-HNE的表达呈负相关，这一结果证实，随着分解还原4-HNE的物质GSTP1表达水平降低，4-HNE表达水平升高，可能造成了前列腺癌细胞增殖及激素逃逸的发生，使患者易发展为去势抵抗性前列腺癌，这尚需大样本进一步研究。
【参考文献】
[1]AwasthiYC,YangY,TiwariNK,etal.Regulationof4-hydroxynonenal-mediatedsignalingbyglutathioneS-transferases[J].FreeRadicBiolMed.2004,37:607-619.
[2]Rochette-EglyC.CellularSignalling.Nuclearreceptors:integrationofmultiplesignallingpathwaysthroughphosphorylation.2003,15:355-366.
[3]LinHK,HuYC,YangL,etal.Suppressionversusinductionofandrogenreceptorfunctionsbythephosphatidylinositol3-kinase/AktpathwayinprostatecancerLNCaPcellswithdifferentpassagenumbers[J].JBiolChem.2003,278:50902-50907.
[4]CaoZG,XuX,XueYM,etal.Comparisonof4-hydroxynonenal-inducedp53-mediatedapoptosisinprostatecancercellsLNCaPandDU145[J].ContempOncol(Pozn).2014，18(1):22-28.
[5]杜稳斌，侯建国，武旗，等.前列腺癌组织中谷胱甘肽S-转移酶P1基因启动子区域甲基化序列分析[J].第二军医大学学报，2008，29(7):762-767.
基金项目：上海市浦东新区卫生和计划生育委员会基金资助项目；项目编号PWZz2013-16；浦东新区卫生系统重点专科建设