论文摘要
目的既往研究发现晶状体损伤可保护视神经损伤后RGCs存活和促进轴突再生,并证明混合晶状体蛋白具有直接的促进作用,但确切作用物质是何种晶状体蛋白（α、β或γ）我们仍不清楚。通过分离和鉴定Long Evans大鼠的可溶性晶状体蛋白各主要成份（α、β和γ）后,按组分别加入离体培养的RGCs培养基中,探讨晶状体中各主要晶状体蛋白成分对离体培养的RGCs突起生长和存活的影响,为进一步研究和阐明晶状体蛋白促RGCs存活和突起生长作用的机制奠定实验基础,为视神经损伤后再生的研究提供新的思路。方法通过分子排阻凝胶色谱的方法对Long Evans大鼠的可溶性晶状体蛋白各主要成份进行分离,之后运用SDS-PAGE电泳和肽质量指纹质谱技术对分离的蛋白质进行鉴定。再将获得的有生物活性的α、β、γ晶状体蛋白分子按组分别加入离体培养的RGCs培养基中,培养2d、4d、6d、8d后,用Leica QWin图像分析系统计数每个200倍视野下分散的、有突起生长的RGCs数目和最长突起长度。结果:1、采用分子排阻凝胶色谱法分离可溶性混合晶状体蛋白,每次试验皆能得到稳定、可重复的凝胶色谱图。分离的凝胶色谱图峰有α、β-H、β-L、γ晶状体蛋白四个蛋白质峰。2、SDS-PAGE电泳鉴定分离的各晶状体蛋白质成份显示α、β、γ各亚基的分子量大小与文献所示的各亚基分子量大小相符;肽质量指纹质谱结果显示: SDS-PAGE所示的α晶状体蛋白鉴定为alpha-crystalline A;SDS-PAGE所示的β-H晶状体蛋白鉴定为beta-crystalline B2;SDS-PAGE所示的β-L晶状体蛋白鉴定为beta-crystalline A4;SDS-PAGE所示的γ晶状体蛋白鉴定为gamma-crystalline D。证明所收集的蛋白质是目的蛋白质。3、α晶状体蛋白组RGCs最长突起长度显著较对照组长,2d、6d有非常显著性差异（p<0.01）,4d有显著性差异（p<0.05）;2d、6d时,β-H晶状体蛋白组RGCs最长突起长度显著长于对照组,统计学有非常显著性差异（p<0.01）;β-L和γ晶体蛋白对体外培养的RGCs突起生长无明显作用,统计学无显著性差异。
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