抗胰岛素单克隆抗体的研制及酶联免疫分析方法的建立

论文摘要

采用杂交瘤技术获得了三株分泌抗胰岛素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中编号为INS49F1的抗体亲和性较好,在酶联免疫分析中得到了初步的应用。 研究并建立了不同模式的胰岛素酶联免疫分析方法。采用两株可相互配对的抗胰岛素单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯板、一株标记辣根过氧化物酶、生物素,分别建立了胰岛素双位点夹心酶联免疫分析法。其方法学灵敏度为1mIU/L;批内、批间变异系数分别为4.6%～5.5%和13.5%～14.8%;回收率96.6%～110.6%;高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.9999;34例健康人血清样品测定值为0.9～7.4mIU/L,该方法与胰岛素放射免疫分析法的相关性方程为y=0.70X-2.22,r=0.957,n=90。采用多抗及酶标二抗的方法对竞争法的包被、标记、反应条件等进行了初步探索。本工作为今后进一步开发胰岛素酶联免疫分析试剂盒奠定了基础。

论文目录

• 第一章 引言
• 1.1 研究背景
• 1.1.1 胰岛素概述
• 1.1.2 糖尿病概述
• 1.2 胰岛素测定常用方法
• 1.2.1 放射免疫分析法
• 1.2.2 免疫放射分析法
• 1.2.3 放射受体分析法
• 1.2.4 酶联免疫分析法
• 1.2.5 发光免疫分析法
• 1.3 本课题研究目的及主要研究内容
• 1.4 国内外研究现状
• 1.4.1 国外研究现状
• 1.4.2 国内研究现状
• 1.5 研究方案及基本原理
• 1.5.1 抗胰岛素单克隆抗体的研制
• 1.5.2 酶联免疫分析方法的建立
• 第二章 抗胰岛素单克隆抗体的制备
• 2.1 仪器、材料和试剂
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要材料和试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 免疫方法
• 2.2.2 小鼠抗血清滴度的测定
• 2.2.3 抗胰岛素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
• 2.2.4 抗胰岛素单克隆抗体的获得及鉴定
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 小鼠抗血清滴度的测定
• 2.3.2 抗胰岛素单克隆抗体的制备情况
• 2.3.3 抗胰岛素单克隆抗体的鉴定
• 2.3.4 IN549F1的初步应用
• 2.4 讨论
• 第三章 双抗体夹心酶联免疫分析法
• 3.1 仪器、材料和试剂
• 3.1.1 主要仪器
• 3.1.2 主要材料和试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 酶标抗体的制备
• 3.2.2 固相抗体的制备
• 3.2.3 胰岛素标准品的配制
• 3.2.4 分析程序
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 方法学优化实验
• 3.3.2 方法学鉴定
• 3.4 讨论
• 2作用及对免疫分析的影响'>3.4.1 EDTA．Na₂作用及对免疫分析的影响
• 3.4.2 酶联免疫分析与放射免疫分析比较
• 第四章 酶联免疫分析法（生物素-亲和素体系）
• 4.1 仪器、材料和试剂
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 生物素-抗体的制备
• 4.2.2 固相抗体及胰岛素标准品的制备
• 4.2.3 分析程序
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 方法学优化实验
• 4.3.2 方法学鉴定
• 4.4 讨论
• 第五章 竞争酶联免疫分析法
• 5.1 仪器、材料和试剂
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 竞争法1（包被抗原、酶标二抗）
• 5.2.2 竞争法2（包被抗原、标记一抗）
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 竞争法1
• 5.3.2 竞争法2
• 5.4 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢