论文摘要
目的：通过检测气道炎症过程中哮喘及糖皮质激素、草分枝杆菌治疗后小鼠体内CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞数量的改变及细胞因子IL-10、IL-17的表达水平，分析并探讨CD4+CD25+调节性T细胞与Th17细胞对哮喘发病的作用机制；探讨草分支杆菌对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞细胞/Th17细胞之间免疫平衡的影响。方法：无特定病原体雌性BALB/c小鼠24只，7周龄，体重约23-25克，采用随机数字法表完全随机平均分为4组，即正常对照组、哮喘组、哮喘地塞米松治疗组、哮喘草分枝杆菌治疗组。在实验的第1天和第14天将哮喘组、哮喘地塞米松治疗组和哮喘草分枝杆菌治疗组小鼠腹腔注射0.2ml卵蛋白（OVA）和氢氧化铝（Al（OH）3）混合液[含OVA100ug，AL（OH）32mg]致敏。在实验的第21-25天将这三组OVA致敏的小鼠放入自制的雾化箱内，以OVA浓度为2%的激发液向箱内雾化，每天雾化30分钟。哮喘地塞米松治疗组于每次雾化激发前30分钟腹腔注射地塞米松，注射量为1mg/Kg，连续注射5天。哮喘草分枝杆菌治疗组在实验的第20天，第23天，第26天腹腔注射草分枝杆菌，共注射三次，每次注射量均为0.57ug。在实验的第27-55天继续予以2%OVA的激发液雾化，每次雾化30分钟，每周3次。正常对照组则给予生理盐水腹腔注射和生理盐水雾化。所有小鼠于末次激发后24h眼球取血，引颈处死小鼠，行小鼠支气管肺泡灌洗，取支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）备用。取小鼠左肺作病理切片，观察小鼠肺部气道炎症改变情况。取小鼠脾脏制备小鼠脾单个核细胞悬液。流式细胞仪检测各组小鼠脾单个核细胞悬液CD4+T细胞亚群中的CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞分别所占的百分比。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组小鼠血清和BALF中细胞因子IL-10、IL-17的表达水平。结果:1)小鼠经OVA雾化激发后出现烦躁不安或少动、呼吸急促甚至呼吸困难、口唇发绀、反应迟钝、大小便失禁等急性哮喘发作的表现；病理检查示：细支气管及血管周围均可见明显以嗜酸性粒细胞，淋巴细胞增多为主的炎性细胞浸润，支气管管壁增厚，管腔狭窄，部分细支气管上皮细胞脱落不完整,提示小鼠哮喘模型建立成功。而经地塞米松和草分支杆菌治疗后哮喘小鼠的气道炎症明显减轻。正常对照组肺组织结构清晰，无气道炎症的表现。2)哮喘组CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞百分比显著低于正常对照组（P<0.05），Th17细胞占CD4+T细胞的百分率显著高于正常对照组（P<0.05）；哮喘地塞米松治疗组、哮喘草分枝杆菌治疗组小鼠CD4+CD25+调节性T细胞细胞占CD4+T细胞百分率较哮喘组小鼠明显增加（P<0.05）但仍低于正常对照组小鼠（P<0.05），Th17细胞占CD4+T细胞的百分率较哮喘组小鼠明显降低（P<0.05）但仍高于正常对照组小鼠（P<0.05）；两种药物治疗组小鼠比较差异无统计学意义（P>0.05）。3)哮喘组小鼠BALF、血清中IL-10水平较正常对照组明显下降（P<0.05）,IL-17水平较正常对照组明显升高（P<0.05）;哮喘地塞米松治疗组、哮喘草分枝杆菌治疗组的BALF、血清中IL-10水平较哮喘组升高（P<0.05）但与正常对照组比较仍较低（P<0.05），而IL-17水平较哮喘组下降（P<0.05）但与正常对照组比较仍增高（P<0.05）;两种药物治疗组小鼠比较差异无统计学意义（P>0.05）。4)各组小鼠脾单个核细胞悬液中CD4+T细胞亚群中CD4+CD25+调节性T细胞百分率与Th17细胞百分率呈负相关关系；CD4+CD25+调节性T细胞/Th17比值与BALF、血清中的IL-10表达水平呈正相关，与BALF、血清中的IL-17表达水平呈负相关；各组小鼠BALF中IL-10，IL-17与血清中IL-10，IL-17表达水平呈正相关。结论：1).哮喘小鼠体内存在CD4+CD25+调节性T细胞数目的减少和IL-10产生降低、Th17细胞的高表达和IL-17的产生增加及CD4+CD25+调节性T细胞/Th17细胞间的免疫失衡等免疫功能紊乱，是哮喘发病的重要机制之一。2).糖皮质激素可增加CD4+CD25+调节性T细胞的数目并促进IL-10的产生、抑制Th17细胞的表达及IL-17的产生并纠正CD4+CD25+调节性T细胞/Th17细胞间的免疫失衡状态,可能是其治疗哮喘的机制之一。3).草分枝杆菌作为一种免疫调节剂在干预性应用后可通过发挥与糖皮质激素相似的作用来达到改善免疫、控制哮喘的目的，但其具体作用机制和通路尚需进一步研究。
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