论文摘要
目的:研究TLR4与SR-PSOX之间的关系,探讨LPS促动脉粥样硬化的可能机制。方法:THP-1细胞经160nmol/L佛波酯孵育24小时,诱导成贴壁的巨噬细胞后,加入不同处理因素。实验1,用0ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml,1000ng/ml的LPS处理THP-1细胞,逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）检测细胞SR-PSOXmRNA表达,选出LPS最佳作用浓度;再以最佳浓度LPS分别孵育THP-1细胞0h,3 h,6 h,12 h,24 h,RT-PCR法检测细胞SR-PSOXmRNA表达,选出LPS最佳作用时间。实验2,根据实验目的分为两部分:（1）经不同因素处理后,检测THP-1细胞SR-PSOX表达情况,实验分为PBS组,LPS组,IgG+LPS组,TLR4抗体+LPS组。10ug/ml抗体预处理THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,应用RT-PCR和Western Blot检测细胞SR-PSOXmRNA及蛋白质表达;（2）经不同因素处理后,检测细胞内脂质蓄积情况,实验分为oxLDL组,LPS+oxLDL组,IgG+LPS+oxLDL组,TLR4抗体+LPS+oxLDL组,10ug/ml抗体预处理THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,再与30μg/mloxLDL孵育24小时,高效液相色谱法与油红O染色观察细胞内脂质含量。实验3,根据实验目的分为两部分,（1）经不同因素处理后,检测THP-1细胞TLR4表达情况,实验分为PBS组,LPS组,IgG+LPS组,SR-PSOX抗体+LPS组,2ug/ml抗体预处理THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,应用RT-PCR法和Western Blot检测细胞TLR4mRNA与蛋白质表达情况。（2）经不同因素处理后,检测细胞内脂质蓄积情况,实验分为oxLDL组,LPS+oxLDL组,IgG+LPS+oxLDL组,SR-PSOX抗体+LPS+oxLDL组,2ug/ml抗体预处理THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,再与30ug/ml oxLDL孵育24小时,高效液相色谱法与油红O染色观察细胞内脂质含量。结果:LPS上调SR-PSOX的mRNA表达,最佳作用浓度为100ng/ml,最佳作用时间为3小时。应用TLR4抗体封闭其功能后, SR-PSOXmRNA和蛋白表达下调,与LPS组相比,差异有统计学意义（p<0.05）;油红O染色细胞内红染脂滴减少,高效液相显示脂质含量降低,与LPS+oxLDL组相比,差异有统计学意义（p<0.05）。应用SR-PSOX抗体封闭其功能后,TLR4的mRNA及蛋白表达与阻断前相比均有一定程度降低,但差异无统计学意义;高效液相色谱与油红O染色均表明细胞内脂质含量减少,与LPS+oxLDL组相比,差异有统计学意义（p<0.05）。结论:1.LPS刺激可以上调THP-1细胞SR-PSOX的表达;用TLR4抗体后,LPS上调THP-1细胞SR-PSOX的作用明显减弱。说明LPS通过TLR4上调THP-1细胞SR-PSOX的表达。2.LPS刺激可以增加THP-1细胞对oxLDL的吞噬;用TLR4抗体后,LPS刺激的THP-1细胞吞噬脂质减少。说明LPS通过TLR4上调THP-1细胞SR-PSOX对脂质的吞噬。