论文摘要
脊髓灰质炎是由脊髓灰质炎病毒感染引起的,没有特效治疗方法,只能接种疫苗预防。口服脊髓灰质炎疫苗已大幅度降低了全球脊髓灰质炎的发病率,然而,由于疫苗相关麻痹型脊灰和疫苗衍生脊髓灰质炎病毒风险,今后必须停止使用口服脊髓灰质炎疫苗,以彻底根除脊髓灰质炎。消灭脊髓灰质炎野病毒之后,将会严格管理来源于野毒株的传统脊髓灰质炎灭活疫苗生产,而用Sabin株研制的脊髓灰质炎灭活疫苗抗原性及免疫原性与传统脊髓灰质炎灭活疫苗不同。新型脊髓灰质炎疫苗形式有待开发。本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达脊髓灰质炎病毒Sabin2结构蛋白,由于脊髓灰质炎病毒的主要抗原位点位于结构蛋白VP1上,其功能蛋白3C及其前体3CD具有蛋白酶的功能,能将多聚蛋白P1剪切加工成结构蛋白VP0、VP3及VP1,因此,首先利用RT-PCR方法扩增得到脊髓灰质炎病毒Sabin2株基因VP1、P1、3C及3CD,分别构建以上基因的重组杆状病毒,然后将重组杆状病毒rBac-VP1、rBac-P1和rBac-3C、rBac-P1和rBac-3CD三组分别感染Sf9细胞进行表达。结果显示:分别克隆有Sabin2株基因VP1、P1、3C及3CD的重组杆状病毒表达质粒转染Sf9细胞后24小时出现细胞病变,72小时细胞病变明显;间接免疫荧光检测显示目的蛋白为细胞内表达;间接免疫荧光及Western-Blot结果显示三组均有VP1结构蛋白的生成,且均具有抗原性;rBac-P1和rBac-3C、rBac-P1和rBac-3CD分别共感染Sf9细胞两组有结构蛋白多聚体的生成,提示可能有病毒样颗粒的生成。脊髓灰质炎病毒Sabin2株结构蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的成功表达,为脊髓灰灰质炎病毒分子生物学特性研究提供了新的科研思路,为新型脊髓灰质炎疫苗形式的开发奠定了基础,提供了新的技术路线。
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标签：脊髓灰质炎病毒论文; 结构蛋白论文; 昆虫细胞论文; 杆状病毒表达系统论文;