五指山原始林区土壤放线菌资源初步调查及生防作用评价

论文摘要

五指山位于海南岛中部,北纬18°45′20″～18°58′54″,东经109°39′38″～109°47′50″,主峰位于五指山市境内,最高峰海拔高度1867米,属国家自然保护区的面积134.4平方公里,为海南最大的自然保护区,是世界上现存地势最高的原始热带雨林之一,蕴藏着极其丰富的微生物资源,至今未开发利用。我们首次对五指山原始林区不同海拔高度和不同植被生境进行了土壤样品采集和放线菌的分离、初步鉴定,以香蕉枯萎镰刀菌4号小种(Fusaium oxysporum f.sp.cubense race 4)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、西瓜叶枯病菌(Alternaria cucumerina)等重要热带植物病原菌为对象进行了生防作用初步评价,旨在发现放线菌新属、新种,获得对主要热带植物病害具良好生防潜力的放线菌菌株和新型高效抗生素产生菌株。初步研究结果如下:一、采用稀释平板法,主要选取葡萄糖天门冬素和土壤浸汁两种选择性培养基,从采自五指山原始林区不同海拔高度不同生境的110份土样中分离得到1261株放线菌,其中链霉菌750株,稀有放线菌511株。二、根据气生菌丝有无将750株链霉菌划分为12个类群,其中黄色类群77株,白孢类群7株,,金色类群64株,,灰褐类群306株,球孢类群8株,青色类群5株,吸水类群11株,粉红孢类群29株,绿色类群5株,烬灰类群225株,灰红紫类群10株,蓝色类群3株。以灰褐类群和烬灰类群为优势类群。三、对不同海拔高度分离到的放线菌数量进行统计分析,发现放线菌的数量随海拔高度的升高而降低。四、用平板对峙法,以香蕉枯萎病菌4号小种、辣椒疫霉菌和西瓜叶枯病菌等三种重要植物病原菌为抑制对象,对1261株放线菌中的223株进行抑菌活性初步测定,筛选出对香蕉枯萎病菌具较强抑菌活性的菌株4株:WZ45、WZ60、WZ196和WZ179,其抑菌距离分别是11mm、12mm、12mm和10mm;筛选出对辣椒疫霉菌具较强抑菌活性的菌株2株:WZ45和WZ60,其抑菌距离均为10mm,强抑菌活性菌株1株WZ160,抑菌距离17mm;筛选出对西瓜叶枯病菌具强抑菌活性的菌株3株:WZ160、WZ32和WZ260,其抑菌距离分别是18mm、15mm和16mm。五、选取一株对辣椒疫霉抑菌活性较高的放线菌WZ60菌株和较早分离出的两株具强烈抑菌活性的LA5、BM10菌株进行了辣椒疫病田间防治效果试验,结果表明WZ60菌株发酵液对辣椒疫病的防治效果达90%,显著高于LA5菌株和BM10菌株的防治效果。六、选取对香蕉枯萎病菌Foc race4具较高抑菌活性的放线菌WZ60菌株进行了田间防治香蕉枯萎病的对比试验,结果表明,WZ60菌株浅盘发酵菌剂于香蕉苗定植前处理定植穴,对香蕉枯萎病具有良好的防治效果,香蕉苗定植后185天仍有81.5%的防治效果。七、对18株放线菌进行了形态观察和16S rDNA序列分析,均属于链霉菌属。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 放线菌在植物病害生物防治中的作用
• 1.1.1 放线菌的拮抗机制
• 1.1.1.1 抗生作用
• 1.1.1.2 竞争作用
• 1.1.1.3 重寄生作用
• 1.1.1.4 促进植物生长
• 1.1.2 放线菌的生防作用
• 1.1.2.1 抗生菌的直接利用
• 1.1.2.2 抗生素的利用
• 1.1.2.3 酶及其代谢物的利用
• 1.2 放线菌的研究概述
• 1.2.1 放线菌的分类地位
• 1.2.2 放线菌的多相分类
• 1.2.2.1 传统分类方法
• 1.2.2.2 数值分类
• 1.2.2.3 化学分类
• 1.2.2.4 基因型分类
• 1.2.3 放线菌的分离
• 1.2.3.1 样品的选择
• 1.2.3.2 选择性分离
• 1.2.3.3 分离方法
• 1.2.4 放线菌的生态分布
• 1.3 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 土壤样品
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 供试病原菌
• 2.1.4 主要药品和试剂
• 2.1.5 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 土壤放线菌的分离
• 2.2.1.1 土样采集方法
• 2.2.1.2 土样预处理方法
• 2.2.1.3 土样稀释液的制备
• 2.2.1.4 土样中放线菌的分离
• 2.2.1.5 菌株的纯化和保存
• 2.2.2 放线菌拮抗性的初步评价
• 2.2.3 田间防治效果评价试验
• 2.2.3.1 WZ60 菌株对辣椒疫病的防治效果试验
• 2.2.3.2 WZ60 菌株对香蕉枯萎病的防治效果试验
• 2.2.4 放线菌的初步鉴定
• 2.2.4.1 链霉菌的分群
• 2.2.4.2 放线菌的形态观察
• 2.2.4.3 放线菌菌株的16S rDNA 测序分析
• 3 结果与分析
• 3.1 五指山土壤放线菌分离结果
• 3.1.1 放线菌的初步归类和链霉菌分群
• 3.1.2 不同海拔高度对放线菌数量的影响
• 3.2 放线菌的初步筛选与评价结果
• 3.3 放线菌WZ60 菌株的田间生防试验结果
• 3.3.1 WZ60 菌株对辣椒疫霉的田间生防效果
• 3.3.2 WZ60 菌株对香蕉枯萎病的生防效果
• 3.4 18 株放线菌菌株的初步鉴定
• 3.4.1 菌株 WZ16 的初步鉴定
• 3.4.2 菌株 WZ37 的初步鉴定
• 3.4.3 菌株WZ45 的初步鉴定
• 3.4.4 菌株WZ103 的初步鉴定
• 3.4.5 菌株WZ204 的初步鉴定
• 3.4.6 菌株WZ212 的初步鉴定
• 3.4.7 菌株WZ260 的初步鉴定
• 3.4.8 菌株WZ294 的初步鉴定
• 3.4.9 菌株WZ312 的初步鉴定
• 3.4.10 菌株WZ385 的初步鉴定
• 3.4.11 菌株WZ386 的初步鉴定
• 3.4.12 菌株 WZ387 的初步鉴定
• 3.4.13 菌株 WZ125 的初步鉴定
• 3.4.14 菌株 WZ190 的初步鉴定
• 3.4.15 菌株 WZ193 的初步鉴定
• 3.4.16 菌株 WZ308 的初步鉴定
• 3.4.17 菌株 WZ388 的初步鉴定
• 3.4.18 菌株 WZ389 的初步鉴定
• 4 讨论
• 4.1 关于分离土壤放线菌所用培养基的选择
• 4.2 关于土壤样品预处理方法的选择
• 4.3 关于分离土壤放线菌所用抑制剂的选择
• 4.4 关于拮抗放线菌的初步筛选问题
• 4.5 关于放线菌的鉴定
• 4.6 需要进一步解决的问题
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢