论文摘要
目的:本研究目的在于探讨环氧合酶-2（cyclooxygenase -2,cox-2）蛋白、mt-P53（mutant type, p53）蛋白在骨肉瘤、骨软骨瘤组织中的表达情况。分析两者在骨肉瘤组织中表达的差异性及相互关联性。通过该研究寻找骨肉瘤一种新的潜在标记物,进一步应用于临床,为骨肉瘤的早期诊断、治疗提供理论和指导。方法:回顾河北医科大学第三附属医院骨病科1998-2004年间收治的骨肉瘤患者档案,筛选临床、病理资料齐全的骨肉瘤患者手术后组织石蜡切片40例作为试验组。其中,男性患者24例,女性患者16例,年龄8-38岁（18.68±6.47）。筛选河北医科大学第三附属医院骨病科同期收治的骨软骨瘤患者手术后组织石蜡切片20例作为对照组。其中,男性患者13例,女性患者7例,年龄9-27岁（17.95±4.77）。以4μm厚度进行连续切片,应用免疫组织化学链霉素亲生物素-过氧化物酶法（ Streptavidin-biotin - Peroxidase-Complex,S-P）进行染色,严格遵循S-P染色试剂盒说明操作,cox-2蛋白染色一抗工作浓度为:1:50, p53蛋白染色一抗浓度为1:100。染色时均需微波修复抗原。光镜下观察染色切片,cox-2蛋白染色:以组织胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性细胞;P53蛋白染色:以胞核内出现界限清晰的棕黄色颗粒者为阳性细胞。随机观察5个高倍视野,依照阳性细胞所占比例分为:“-”阳性细胞所占比例<5%;“+”阳性细胞所占比例5%-25%;“++”阳性细胞所占比例26%-50%;“+++”阳性细胞所占比例>50%。分别统计两者的阳性表达情况,所得数据应用SAS v6.12统计软件处理,采用chi-square test进行χ2检验,α=0.05为水准,分别统计两者在骨肉瘤、骨软骨瘤组织细胞中阳性表达的差异性。采用Spearman等级相关分析法检验两者在骨肉瘤中阳性表达之间的相关性,α=0.05为水准。结果:1通过光镜下观察免疫组织化学染色状况,40例骨肉瘤组织中27例cox-2蛋白染色显示为阳性,且多为过高表达,阳性率为67.5%。20例骨软骨瘤中仅3例显示低阳性表达结果,阳性率为15%。阳性染色主要位于肿瘤组织的胞浆中。两者存在显著性差异,χ2 =14.7,P<0.05,有统计学意义。2 mt-P53蛋白于40例骨肉瘤中22例染色显示为阳性结果,且多为高表达,阳性率为55.0%,阳性染色主要位于组织的胞核中。20例骨软骨瘤中均未显示阳性结果。两者存在显著性差异,χ2=17.368,P<0.05,有统计学意义。3在40例骨肉瘤患者中有18例cox-2蛋白、mt-P53蛋白染色均为阳性,有9例染色均为阴性。通过Spearman等级相关分析法检验两者在骨肉瘤中阳性表达的相关性,显示两者存在显著正相关,rs=0.58, p<0.05,有统计学意义。结论:1经本研究证实,cox-2蛋白在骨肉瘤组织细胞中多数呈现过高阳性表达,在良性肿瘤中少数呈现低阳性表达,两者存在显著性差异,提示cox-2蛋白的过高表达与骨肉瘤的发生、发展密切相关,cox-2有望成为骨肉瘤新的潜在标记物。2突变型p53（mt-p53）蛋白在良性骨肿瘤中不表达,mt-p53蛋白仅在骨肉瘤组织细胞中可被检测到,这提示mt-p53基因可能与骨肉瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关,可作为肿瘤早期诊断和预后的指标。3 cox-2蛋白、mt-p53蛋白在骨肉瘤中的表达呈正相关,提示在骨肉瘤的发生、发展过程中两者可能存在相互影响、相互协同作用。临床上通过两者的联合检验,对骨肉瘤的早期诊断和预后具有重要意义。