论文摘要
栽培甜菜与白花甜菜杂交而获得的单体附加系M14,其传递率是97%,单体附加系的传递率如此高的原因是因为M14品系中存在无融合生殖基因。为了克隆M14品系中无融合生殖相关基因,本实验室前期采用抑制消减杂交方法,在甜菜开花的减数分裂期取样,建立了甜菜无融合生殖系M14特异表达基因的抑制消减杂交文库,并对全部295个克隆进行了测序,共测得211个序列表达标签（expressed sequence tags,ESTs）,用DNAMAN软件筛选可编码蛋白质的ESTs 28个。经NCBI在线相似性搜索工具BLAST进行比对,挑选其中4个有参考价值的ESTs（Me341,Me263,Me219,Me206）作为获得全长基因的侯选ESTs。以这4个ESTs为模板设计特异性引物,用RT-PCR法证实这4个基因在甜菜M14中均有特异表达。通过快速扩增cDNA末端（rapid amplification of cDNA ends,RACE）法获得Me341基因的全长。用生物信息学的方法进行分析,得知Me341基因与菠菜中开花转录因子有88%的相似性,并推测该基因起始密码子于全长的372bp处,编码230个氨基酸。今后需对该基因的结构和功能进一步探索。
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中文摘要英文摘要第1章 前言1.1 植物无融合生殖概述1.2 cDNA水平获得基因全长1.2.1 Northern杂交分析1.2.2 cDNA文库克隆基因1.2.3 以EST为基础的基因克隆法1.2.4 结合EST数据库的基因电子拼接1.2.5 RACE法扩增基因全长1.3 生物信息学产生及研究内容1.3.1 生物信息学研究的对象1.3.2 基础生物信息学研究内容1.4 本实验目的及技术路线第2章 材料与方法2.1 实验材料2.1.1 植物材料2.1.2 SSH法获得特异表达ESTs片段2.1.3 引物2.1.4 主要仪器设备2.1.5 实验试剂盒，药品及实验耗材2.2 实验方法2.2.1 甜菜M14特异表达ESTs的生物信息学分析2.2.2 利用RT-PCR方法鉴定甜菜M14中特异表达ESTs2.2.3 RACE法克隆基因3'端2.2.4 RACE法克隆基因5'端2.2.5 基因全长的拼接与生物信息学分析第3章 结果3.1 甜菜M14特异表达ESTs的生物信息学分析3.2 甜菜M14特异表达ESTs的RT-PCR法鉴定3.2.1 总RNA提取结果3.2.2 甜菜特异表达基因RT-PCR鉴定结果3.3 甜菜M14特异表达基因Me206，Me219，Me263及Me341基因3'RACE结果3.4 甜菜M14特异表达Me341基因5'RACE结果3.5 Me341基因全长拼接结果3.6 Me341基因核酸全长序列分析3.7 Me219，Me263基因3'端序列结果3.8 Me219，Me263基因3'端序列分析结果第4章 讨论4.1 反转录4.2 引物设计4.3 关于MADS框基因4.4 进一步研究的方向结论致谢攻读学位期间发表论文附录参考文献独创性声明学位论文版权使用授权书
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标签：无融合生殖论文; 甜菜论文; 抑制消减杂交论文; 快速扩增末端论文; 生物信息学论文;
