论文摘要
菌影(bacterial ghost,BG)是一种新型的疫苗及佐剂形式，其实质是一种不含胞浆及核酸等内容物的空细胞体，它最大的特点是保留了和活菌一样的完整内外膜结构，能够有效刺激机体产生特异性和非特异性免疫应答，抵抗病原微生物的侵袭。相对于传统灭活疫苗来说，它的表面抗原结构得到最大程度的保留，免疫原性高，较之新型疫苗又兼有疫苗和佐剂的双重作用，并可在其内部及外膜上负载外源抗原，成为优良的抗原递送载体，同时为联合疫苗的研究提供研究平台，在致病性微生物越来越难以控制的今天，菌影系统开始受到国内外研究者的关注。肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae，Kpn）广泛分布于自然界，是人和动物肠道、呼吸道的致病菌，该菌近年来成为仅次于大肠杆菌的最重要的致病菌。副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)是猪Glasser’s病的病原体，猪上呼吸道的一种共栖菌，它可在特定条件下侵入机体而引起以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的全身性疾病。目前关于这两种菌尚无有效的预防和控制措施，主要是采用灭活苗进行防控。但是目前的灭活苗在灭活的过程中常常降低了抗原性，使保护率降低，副作用增加，因此研究开发新型疫苗成为了人们研究的热点。本项研究以荚膜层区别较大的肺炎克雷伯菌和副猪嗜血杆菌为代表，建立了采用抗菌肽联合超高压制备细菌菌影的方法。将不同浓度的抗菌肽加入到培养至对数生长期的细菌菌液中，4℃过夜作用，然后将处理后的菌液在不同压强的超高压下进行超高压处理而制备成菌影，通过对其形态学观察、裂解情况、安全性和免疫学特性的研究从而确定制备的条件。实验结果显示，在抗菌肽浓度为28μg/mL、压强为200MP时，通过平板计数法检测裂解率，未能检测到活菌的存在。因此认定其裂解达到100%。在电镜下可以观察到，所制备的副猪嗜血杆菌菌影和肺炎克雷伯菌菌影的外壳结构都保持完整，内容物得到释放。将制备的菌影大剂量免疫小鼠后观察生长情况，结果显示小鼠生长正常，与阴性对照组无显著差异，表明所制备的菌影有良好的安全性。血清抗体检测结果显示，接种了菌影和灭活苗的小鼠都能产生较高的血清抗体效价，接种菌影的小鼠其产生的效价略高于接种灭活苗的小鼠所产生的抗体效价，在二免后两周血清效价可达到6400倍。进行攻毒实验，结果显示腹腔注射菌影后对小鼠有100%的保护率。本研究结果显示，通过抗菌肽联合超高压的方法制备的菌影有良好的安全性和免疫原性，对小鼠也能起到较好的免疫保护效果，为菌影的制备提供了一种新的思路和方法，对下一步大规模制备和工业化生产奠定了一定的基础。
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- [1].细菌菌影疫苗的研究进展[J]. 微生物学免疫学进展 2016(03)