桂枝汤苯丙烯类化合物对PGE2代谢关键靶点影响及其综合效应

论文摘要

桂枝汤（由桂枝、芍药、甘草、生姜、大枣组成）是治疗太阳中风的主方,能解肌发表,调和营卫,用于外感风寒表虚证。前期的研究工作证明,桂枝汤对体温有双向调节作用,对相关的多条细胞内信号转导通路有影响。本所化学室对桂枝汤进行了提取分离,获得了有效部位A（Fr.A）。进一步的药理实验证明Fr.A与其全方一样,通过影响发热信号传导通路上酶的活性和水平,对体温有双向调节作用。Fr.A中含有分子量小于1000的,约50个不同对应主要分子量的指纹峰,其中可能的已知物质约25个,分别来自全方5个组成药味。 本研究论文以前列腺素E2（PGE2）中枢致热的信号转导通路为主线,以原代培养的脑微血管内皮细胞（rCMEC）为研究对象,探讨Fr.A中分离获得的6个苯丙烯类成分桂皮醛、邻甲氧基桂皮醛、桂皮醇、邻甲氧基桂皮醇、桂皮酸及邻甲氧基桂皮酸对IL-1β刺激的rCMEC内PGE2合成代谢主要靶点的影响;同时考察6个苯丙烯类成分联合用药后对PGE2合成代谢主要靶点的影响,用等效线法进行联合用药性质的判断。以双向电泳技术（2-D）为技术平台,通过观察差异蛋白质点的变化,以期进一步揭示方剂的整合作用。进行了以下实验,其研究结果简单概括如下: 一、Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的rCMEC p-p38 MAPK蛋白相对表达水平的影响 以30ng/ml的IL-1β刺激rCMEC 0.5、1、2、4、8、12、24h,4h细胞内p-p 38 MAPK蛋白相对表达水平至峰值,8h有所降低,呈时间依赖关系。以10、20、30、40、50ng/ml的IL-1β刺激rCMEC 12h后,细胞内p-p 38 MAPK蛋白相对表达水平均显著增高,并呈浓度依赖关系。 分别给予桂枝汤有效部位A中6个苯丙烯类成分后,以30ng/ml IL-1β刺激rCMEC 4h,观察细胞内p-p 38 MAPK相对表达水平。实验结果显示,桂皮醛、邻甲氧基桂皮醛,桂皮醇、邻甲氧基桂皮醇,桂皮酸、邻甲氧基桂皮酸抑制内皮细胞p-p-38 MAPK蛋白相对表达量的IC50分别为:154.82、210.64、67.60、270.02、596.94、1003.29μg/ml。 二、Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的rCMEC sPLA2活性的影响 以30ng/ml的IL-1β刺激rCMEC 0.5、1、2、4、8、12、24h,4h细胞内sPLA2活性至峰值,8h有所降低,呈时间依赖关系。以10、20、30、40、50ng/ml的IL-1β刺激rCMEC 4h后,sPLA2活性均显著增高,并呈浓度依赖关系。 分别给予桂枝汤有效部位A中6个苯丙烯类成分后,以30ng/ml IL-1β刺激rCMEC 4h,测定细胞外液中sPLA2活性。实验结果提示,桂皮醛、邻甲氧基桂皮醛、桂皮醇、邻甲氧基桂皮醇、桂皮酸及邻甲氧基桂皮酸抑制内皮细胞外液sPLA2活性的IC50分别为:235.99、123.35、213.10、425.31、154.86、468.65μg/ml。 三、Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的rCMEC cPLA2活性的影响 以30ng/ml的IL-1β刺激rCMEC 0.5、1、2、4、8、12、24h,12h细胞内cPLA2活性至峰

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献综述一
• 文献综述二
• 第一部分
• 第一章 大鼠脑微血管内皮细胞的培养及鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分
• 第二章 Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞内p-p 38 MAPK蛋白相对表达水平的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 2活性的影响'>第三章 Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞sPLA₂活性的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 2活性影响'>第四章 Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞内cPLA₂活性影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第五章 Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞内COX mRNA表达的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第六章 Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞内COX活性影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第七章 Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞内15-PGDH活性的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 2释放的影响'>第八章 Fr.A苯丙烯类成分对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞PGE₂释放的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三部分
• 2合成代谢主要靶点的影响'>第九章 Fr.A苯丙烯类成分联合用药后对II-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞内PGE₂合成代谢主要靶点的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第四部分
• 第十章 Fr.A苯丙烯类成分及联合用药后对IL-1β刺激的大鼠脑微血管内皮细胞蛋白质组双向电泳分析
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 结语
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 附图
• 中医药科研项目查新报告书