大花金挖耳内生菌分离及其发酵产物抑菌活性研究

论文摘要

大花金挖耳（Carpesium macrocephalum）为菊科天明精属多年生草本植物,研究发现其为一种优秀的杀菌植物。植物内生菌能够产生许多结构新颖、生理活性独特的或与宿主植物相同和相似的天然生理活性物质,同时植物内生菌具有普遍的抑菌活性。基于此,本研究对大花金挖耳内生菌进行了初步研究,主要结果如下:1通过组织块法和匀浆法,采用PDA、牛肉蛋白胨和高氏一号3种分离培养基,从大花金挖耳茎、叶、花、果实和根等组织中分离纯化得到92株内生菌,其中内生真菌68株,内生细菌16株,内生放线菌8株。2对峙法抑菌活性测定表明,大花金挖耳92株内生菌中,对病原真菌小麦赤霉、番茄灰霉、辣椒疫霉、玉米大斑、苹果炭疽具有拮抗活性的菌株占到总菌株数的38.04%、47.83%、36.96%、39.13%、40.22%。采用生长速率法和活体组织法测定22株内生菌发酵产物的抑菌活性,结果表明内生真菌H-18、G-6和内生细菌H-32等3株内生菌的发酵产物具有很好的抑菌作用,并确定内生真菌H-18做为进一步研究的对象。3经多种培养基培养及结合黑光、紫外、低温等不同条件诱导,最后使H-18菌株产生分生孢子,经过经典分类学对比鉴定,H-18菌株为半知菌亚门丛梗孢目镰孢霉属真菌。4结合抑菌活性测定,确定了H-18菌株较为合适的基础发酵条件为:PD培养基,接种后静置48h,温度28℃,摇床转速110r·min-1,发酵时间10-12天。5对H-18进行抑菌活性研究发现,其主要抑菌活性成分存在于菌丝体中。其菌丝丙酮提取物在10.0mg·mL-1剂量下,对番茄灰霉病的防治效果可达54.46%。H-18菌丝体的石油醚、丙酮和甲醇浸膏对番茄灰霉病菌菌丝生长的EC50值分别达到了0.137mg·mL-1、0.0702mg·mL-1、0.0394mg·mL-1。经有机溶剂提取及硅胶柱层析分离,从H-18菌丝体中分离得到四种化合物SD-1、SF-6、BF-9和BE-3,其结构需经进一步鉴定。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述
• 1.1 植物内生菌的定义
• 1.2 植物内生菌的研究进展
• 1.2.1 产抗肿瘤活性物质的内生菌
• 1.2.2 产杀虫活性物质的内生菌
• 1.2.3 产抑菌活性物质的内生菌
• 1.2.4 产激素的内生菌
• 1.2.5 产其他类物质的内生菌
• 1.3 大花金挖耳研究简况
• 1.3.1 大花金挖耳形态学特征及地理分布
• 1.3.2 大花金挖耳化学成分及生物活性
• 1.4 选题依据及论文设计思路
• 第二章 大花金挖耳内生菌的分离及抑菌活性筛选研究
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 供试病原菌
• 2.1.3 供试植物
• 2.1.4 供试药剂
• 2.1.5 试剂
• 2.1.6 仪器
• 2.1.7 培养基
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 内生菌的分离和纯化
• 2.2.2 内生菌的保藏
• 2.2.3 内生真菌的鉴定
• 2.2.4 菌株代谢产物的处理
• 2.2.5 遗传稳定性测定方法
• 2.2.6 抑菌活性测定方法
• 2.3 结果
• 2.3.1 最佳消毒方法
• 2.3.2 内生菌分离结果
• 2.3.3 第一次筛选结果
• 2.3.4 第二次筛选结果
• 2.3.5 H-18、G-6 和H-32 菌株的遗传稳定性
• 2.4 小结与讨论
• 第三章 内生真菌 H-18 发酵产物抑菌活性研究
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 菌株
• 3.1.2 供试病原菌
• 3.1.3 供试植物
• 3.1.4 供试药剂
• 3.1.5 试剂
• 3.1.6 仪器
• 3.1.7 培养基
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 抑菌活性测定方法
• 3.2.2 内生真菌H-18 代谢产物的抑菌谱
• 3.2.3 H-18 的固体培养
• 3.2.4 诱导H-18 产生分生孢子的方法
• 3.2.5 H-18 菌株鉴定
• 3.2.6 内生真菌H-18 发酵条件筛选
• 3.2.7 内生真菌H-18 菌丝化学成分系统预试方法
• 3.2.8 内生真菌H-18 菌丝体抑菌活性成分分离
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 内生真菌H-18 代谢产物的抑菌谱
• 3.3.2 内生真菌H-18 代谢产物抑菌活性活体测定结果
• 3.3.3 诱导产孢结果
• 3.3.4 H-18 菌株鉴定
• 3.3.5 H-18 菌株发酵条件的筛选
• 3.3.6 H-18 菌株菌丝浸膏成分预试
• 3.3.7 H-18 菌丝三种萃取浸膏的抑菌活性测定
• 3.3.8 H-18 菌丝抑菌活性成分分离
• 3.4 小结与讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简介