五味子功能饮料及保健葡萄酒的研制

论文摘要

五味子为木兰科五味子（Schisandra chinensis （Turcz.） Baill,俗称北五味子）或华中五味子（S.sphenanthera Rehd.et Wils,俗称南五味子）的干燥成熟果实,五味子已有上千年的药用历史,药用价值极高。现代药理学研究表明五味子的生物活性成分木脂素,尤其是联苯环辛烯类木脂素,具有护肝、镇静催眠、抗氧化应激、促进血管舒张、抗炎、抗癌以及增强免疫力等作用。本研究建立了一种同时检测五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素5种有效成分的高效液相色谱法,优化了五味子功能饮料的制备工艺并考察了其稳定性,同时对五味子保健葡萄酒的制备工艺进行了研究并对其进行了功能评价。主要研究及结果如下：经紫外分光光度计扫描确定五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素同时检测的最佳波长为254nm,建立的HPLC检测方法为：色谱柱：KromasilC18柱（250×4.6nm）；波长：254nm；流速：1.0mL/min;柱温：30℃；试样温度：室温；进样量：20μL；流动相：甲醇（A）和水（B）进行梯度洗脱,0-8min30%B,8-12min30%-20%B,12-20min20%-10%B,20-30min10%B。并对其线性范围、精密度、稳定性、重复性和加标回收率进行了考察。结果表明该方法精确可靠、重复性好,可用于测定五味子和含五味子的保健食品中的有效成分含量。对五味子的提取工艺进行了研究,采用正交试验设计分别考察了料液比、温度、提取时间、提取次数及醇浓度对五味子木脂素提取率的影响。通过正交实验,优化得到水提法的最佳工艺条件是：料液比1：12,温度50℃,提取时间2h,提取3次；醇提法的最佳工艺条件是：料液比1：12,醇浓度80%,提取温度90℃,提取时间2h,提取3次。同时对比了醇提水沉法与水提法和醇提法最佳工艺的五味子醇甲得率和5种木脂素总得率,结果表明醇提法提取所得五味子醇甲含量和5种木脂素总含量均高于水提法和醇提水沉法,而水提法和醇提水沉法两种方法所得提取物中五味子醇甲含量差别不大。因此五味子功能饮料的工艺中选用水提法,而五味子保健葡萄酒的制备工艺中选用醇提法。探究了五味子功能饮料的制备工艺,干燥成熟的五味子果实经提取、过滤、澄清、掩蔽和调配可得五味子功能饮料。经实验优化得到最佳澄清工艺为：2%壳聚糖溶液作为最佳澄清剂,每100mL的五味子水提物（生药量为0.02g/mL）添加2%壳聚糖溶液2mL,澄清条件为室温下静置1h。最佳掩蔽包合工艺为：以0.01g/mL的五味子提取液为基准,按1.6g/100mL添加β-环糊精,在50℃下搅拌80min。甜菊糖和蜂蜜添加量为饮料质量的0.8‰和2%（以0.01g/mL的五味子提取液为基准）。同时对五味子功能饮料进行了稳定性考察,结果表明经强光照射和加速实验后,五味子功能饮料性状、pH、澄清度和功效成分含量并无明显变化。研究了五味子保健葡萄酒的制备工艺,干燥成熟的五味子果实经提取、过滤、浓缩、精滤和调配等步骤可得五味子保健葡萄酒。该五味子保健葡萄酒符合GB15037-2006《葡萄酒》和GB16740-1997《保健（功能）食品通用标准》的规定。考察了五味子保健葡萄酒的保健作用,以8.3mL/kg·bw、16.7mL/kg·bw、50.0mL/kg·bw剂量的五味子保健葡萄酒经口灌胃给予小鼠30天。50.0mL/kg·bw剂量能延长阀剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间、缩短巴比妥钠睡眠潜伏期,与空白和酒基对照组比较差异有显著性（P<0.05）,表明五味子保健葡萄酒具有改善睡眠的功能；16.7mL/kg·bw、50.0mL/kg·bw剂量能提高小鼠迟发型变态反应能力、抗体生成细胞数和NK细胞活性,与空白和酒基对照组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）,表明五味子保健葡萄酒具有增强免疫力的功能。

论文目录

• 縮略语
• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 1.1 概述
• 1.2 国内外研究现状
• 1.2.1 五味子中医理论
• 1.2.2 五味子的化学成分
• 1.2.3 五味子木脂素成分的提取与检测研究现状
• 1.2.4 五味子的药理作用
• 1.2.5 五味子的开发利用和应用前景
• 1.3 研究价值及意义
• 1.3.1 为消费者提供保健食品
• 1.3.2 为企业开发产品
• 第二章 高效液相色谱法检测五味子中五种有效成分的方法建立
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 试剂与材料
• 2.1.2 仪器与设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 标准储备液的制备
• 2.2.2 标准混合工作溶液的制备
• 2.2.3 供试品溶液的制备
• 2.2.4 测定
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 检测波长的选择
• 2.3.2 DAD定性分析
• 2.3.3 流动相条件选择
• 2.3.4 HPLC色谱条件
• 2.3.5 方法学验证
• 2.3.5.1 标准曲线的绘制
• 2.3.5.2 精密度试验
• 2.3.5.3 稳定性试验
• 2.3.5.4 重复性试验
• 2.3.5.5 加标回收率试验
• 2.3.5.6 定量检出限的判定
• 2.3.6 样品分析
• 2.4 本章小结
• 第3章 五味子木脂素提取工艺的优化
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 试剂与材料
• 3.1.2 仪器与设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 水提法最佳工艺优化设计
• 3.2.2 醇提法最佳工艺优化设计
• 3.2.3 水提最优工艺条件验证
• 3.2.4 醇提最优工艺条件验证
• 3.2.5 醇提水沉法与水提法和醇提法最佳工艺得率比较
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 水提法正交设计实验分析
• 3.3.1.1 以五味子醇甲含量为评价指标的结果分析
• 3.3.1.2 以五种木脂素总含量为评价指标的结果分析
• 3.3.2 醇提法正交设计实验分析
• 3.3.2.1 以五味子醇甲含量为指标的实验结果分析
• 3.3.2.2 以五种木脂素总含量为指标的结果分析
• 3.3.3 水提最优工艺条件验证实验结果分析
• 3.3.4 醇提最优工艺条件验证实验结果分析
• 3.3.5 醇提水沉法与水提法和醇提法最佳工艺得率比较结果
• 3.4 本章小结
• 第4章 五味子功能饮料生产工艺优化及稳定性考察
• 4.1 实验材料
• 4.1.1 试剂与材料
• 4.1.2 仪器与设备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 五味子饮料的工艺流程
• 4.2.2 工艺说明
• 4.2.3 水提物的澄清除涩处理
• 4.2.3.1 澄清剂的制备方法
• 4.2.3.2 澄清度的测定
• 4.2.3.3 单宁含量的检测
• 4.2.3.4 有效成分含量的检测
• 4.2.3.5 澄清剂加入量的考察
• 4.2.3.6 处理时间的考察
• 4.2.3.7 处理温度的考察
• 4.2.4 感官评定方法
• 4.2.5 掩蔽工艺条件的确定
• 4.2.6 调配单因素实验
• 4.2.6.1 甜菊糖添加量的考察
• 4.2.6.2 蜂蜜添加量的考察
• 4.2.7 饮料稳定性考察
• 4.2.7.1 强光照射实验
• 4.2.7.2 加速稳定性实验
• 4.2.7.3 长期稳定性实验
• 4.2.7.4 低温稳定性实验
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 澄清工艺的确定
• 4.3.1.1 以透光率为指标的考察结果
• 4.3.1.2 以单宁减少量为指标的实验结果
• 4.3.1.3 以有效成分保留量为指标的实验结果
• 4.3.2 掩蔽工艺的确定
• 4.3.2.1 β-环糊精加入量的考察结果
• 4.3.2.2 β-环糊精包合温度考察结果
• 4.3.2.3 搅拌时间考察结果
• 4.3.3 调配单因素实验结果
• 4.3.3.1 甜菊糖添加量的确定
• 4.3.3.2 蜂蜜添加量的确定
• 4.3.4 饮料稳定性考察结果
• 4.3.4.1 强光照射实验
• 4.3.4.2 加速稳定性实验
• 4.3.4.3 长期稳定性实验
• 4.3.4.4 低温稳定性实验
• 4.4 本章小结
• 第5章 五味子保健葡萄酒制备工艺研究及其功能学评价
• 5.1 实验材料
• 5.1.1 实验试剂与材料
• 5.1.2 实验仪器
• 5.1.3 实验动物与分组
• 5.1.3.1 改善睡眠功能评价实验动物与分组
• 5.1.3.2 增强免疫力功能评价实验动物与分组
• 5.1.4 实验条件
• 5.1.5 试验剂量选择与样品处理
• 5.2 试验方法
• 5.2.1 五味子保健葡萄酒工艺流程及工艺说明
• 5.2.1.1 五味子保健葡萄酒工艺流程
• 5.2.1.2 五味子保健葡萄酒工艺说明
• 5.2.2 五味子保健葡萄酒质量标准
• 5.2.3 五味子保健葡萄酒改善睡眠功能评价
• 5.2.3.1 直接睡眠评价
• 5.2.3.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验
• 5.2.3.3 戊巴比妥钠阀下剂量催眠实验
• 5.2.3.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验
• 5.2.4 五味子保健葡萄酒增强免疫力功能评价
• 5.2.4.1 脏器/体重比值测定
• 5.2.4.2 迟发型变态反应（DTH）（足趾增厚法）
• 5.2.4.3 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验（MTT法）
• 5.2.4.4 抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）
• 50)的测定'>5.2.4.5 半数溶血值(HC₅₀)的测定
• 5.2.4.6 小鼠碳廓清实验
• 5.2.4.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）
• 5.2.4.8 NK细胞活性的测定（乳酸脱氢酶测定法）
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 五味子保健葡萄酒质量标准
• 5.3.2 五味子保健葡萄酒改善睡眠功能实验结果
• 5.3.2.1 五味子保健葡萄酒对动物体重的影响
• 5.3.2.2 直接睡眠实验
• 5.3.2.3 延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间实验
• 5.3.2.4 戊巴比妥钠阀下剂量催眠实验
• 5.3.2.5 巴比妥钠睡眠潜伏期实验
• 5.3.3 五味子保健葡萄酒增强免疫力功能实验结果
• 5.3.3.1 五味子保健葡萄酒对小鼠体重的影响
• 5.3.3.2 五味子保健葡萄酒对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响
• 5.3.3.3 五味子保健葡萄酒对小鼠细胞免疫功能的影响
• 5.3.3.4 五味子保健葡萄酒对体液免疫的影响
• 5.3.3.5 五味子保健葡萄酒对小鼠单核—巨噬细胞吞噬功能的影响.
• 5.3.3.6 五味子保健葡萄酒对小鼠NK细胞活性的影响
• 5.4 结论
• 5.4.1 五味子保健葡萄酒改善睡眠功能结论
• 5.4.2 五味子保健葡萄酒增强免疫力功能结论
• 5.5 本章小结
• 第6章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 主要创新
• 6.3 进一步研究方向
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果