弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2、bcl-6基因所在染色体区域异常的检测及意义

论文摘要

研究背景 弥漫性大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）是最常见的、高度恶性的非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma，NHL），在针对该恶性肿瘤的化疗中发现仅40％-50％的患者可获得缓解。 2000年以来国外学者利用cDNA微阵列技术及免疫组化技术，依据免疫表型和基因表达可将DLBCL分成预后有显著差异的三个分子亚型，即生发中心B细胞样（germinal center B-cell like，GCB）DLBCL和活化B细胞样（activated B-cell like，ABC）DLBCL及第三型（type 3）。第三型是异质性的，尚未得到很好的确定，但预后与ABC型无显著差异。因此，目前在基因及蛋白水平上可以简单地将DLBCL分成两类分子亚型：GCB与non-GCB（non-germinal center B-cell like，非生发中心B细胞样DLBCL）。应用CHOP方案治疗这两类基因表达不同的DLBCL，5年生存率分别为70％和12％，GCB预后明显优于non-GCB。2004年Hans等人运用cDNA微阵列作为参照，采用三种基因蛋白产物（CD10，BCL-6，MUM1）免疫组化标记方法，据免疫表型将DLBCL简单地分成预后有显著差异的GCB与non-GCB两类分子亚型，同样提示前者预后较好。 世界卫生组织认为，检测遗传学异常是恶性淋巴瘤分类诊断最可靠的指标。以荧光标记DNA进行原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization，FISH）的新遗传学方法对细胞分子遗传学的诊断有重要价值。 国外绝大多数研究者在用石蜡包埋组织进行FISH检测时采用了组织薄切片，尽管这种方法标本容易获得，易与HE染色相比较，但这种方法有其局限性，比如细胞重叠或细胞核被切断均可造成检测结果的误差，加之石蜡及固定剂的影响使探针与靶DNA结合较困难，常因背景过深过信号过于微弱而导致实验失败。 比较基因组杂交（CGH）能够在全基因组范围内观察肿瘤细胞与正常细胞有明显DNA数量不同的染色体区域。我们综合了近几年国外几个不同实验室的CGH分析结果，首先建立了淋巴瘤发病的多阶段、多途径的树模型，通过该树

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 主要实验材料、试剂、仪器及溶液配制
• 第1章 半巢式PCR检测DLBCL t（14；18）易位
• 1.1 PCR加样过程中无DNA原则控制污染的提出与研究
• 1.2 半巢式PCR检测DLBCL t（14；18）易位的设计与应用
• 第2章 组织芯片对DLBCL进行亚分类研究
• 2.1 TMA制作方法的改进
• 2.2 蛋白表型对DLBCL进行亚分类
• 第3章 细胞阵列FISH检测DLBCL特定的染色体异常
• 3.1 细胞及细胞核微阵列的制作及应用
• 3.2 FISH检测bcl-2及bcl-6相关染色体异常
• 第4章 DLBCL染色体异常及分子分类与临床因素的关系
• 全文总结
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间成果
• 致谢
• 原创性声明及版权使用授权说明