大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡相关基因的表达及依达拉奉的干预

论文摘要

背景与目的 脑缺血损伤后细胞凋亡受诸多基因调控。由死亡受体Fas所介导的凋亡通路主要包括Fas-FADD-Caspase-8和Fas-Daxx-ASK1两条。其中FADD和Caspase-8在多条死亡受体介导的凋亡途径中起着关键作用。Daxx则在基因转录和细胞凋亡两方面发挥重要作用。FAP-1是Fas信号转导中的负性调节因子，也是唯一与FasC端负性调节区相结合的因子。有关FADD、FAP-1和Daxx在脑缺血再灌注损害中的研究报道极少。自由基清除剂依达拉奉是目前临床证明有效的神经保护剂，它能够减少脑缺血损伤后细胞凋亡，但其影响细胞凋亡的机制尚不清楚。本研究通过检测局灶性脑缺血后FADD、FAP-1和Daxx等基因在大鼠脑内的表达变化，以探讨其在脑缺血损伤中的作用，并以依达拉奉作干预，观察其对上述基因和细胞凋亡的影响，以期为进一步研究脑缺血后细胞凋亡分子病理机制以及脑梗死的防治提供实验基础。 方法 10-12周龄健康雄性Sprague-Dawley大鼠186只，随机分为正常组（n=6）、假手术对照组（n=60）、脑缺血模型组（n=60）和依达拉奉治疗组（n=60），线栓法制备大脑中动脉梗阻（MCAO）模型，缺血2小时后恢复再灌注，药物组在脑缺血再灌注即刻和12小时各腹腔注射依达拉奉3mg／kg，模型组注射等量的生理盐水。Longa’s的5级标准评分法评价神经功能缺损。再灌注后1小时、3小时、6小时、12小时和24小时处死动物。HE染色和Nissl染色观察病理学变化，免疫组织化学、RT-PCR、Western blot等方法分别检测缺血侧顶叶大脑皮层FADD、FAP-1、Daxx、Caspase-8蛋白或／和mRNA表达变化；免疫荧光激光扫描共聚焦显微镜观察FADD和Daxx在神经元的定位；末端标记法原位检测神经细胞凋亡。 结果 （1）模型成功率为70.83％，死亡率为8.04％。（2）模型组再灌注24小时HE染色显示出典型的坏死灶和神经元丢失，Nissl染色可见细胞肿胀，尼氏体消失，依达拉奉可以减轻上述损害及大鼠神经功能缺损评分（P＜0.05）。（3）正常组和假手术组偶尔可以检测到凋亡细胞；模型组再灌注3小时凋亡细胞开始增加，以后时间点持续增加，24小时达到高峰；依达拉奉能够减轻再灌注6小时以后细胞凋亡（P＜0.05～0.001）。（4）正常组和假手术组可以检测到少量的FADD mRNA和蛋白表达；模型组FADD mRNA和蛋白表达变化一致，

论文目录

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• 缩略词
• 论文正文
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 第三章 结果
• 3.1 动物模型的成功性和神经功能缺损体征的变化
• 3.2 病理学研究
• 3.3 脑缺血再灌注后神经元凋亡的变化
• 3.4 各基因mRNA及其蛋白在大脑皮层的表达变化
• 第四章 讨论
• 4.1 动物模型的评价
• 4.2 Fas-FADD-Caspase-8通路与脑缺血的关系
• 4.3 Daxx与脑缺血的关系
• 4.4 Fas-FADD通路与Fas-Daxx通路的关系
• 4.5 FAP-1与脑缺血的关系
• 4.6 依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用
• 4.7 展望
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述一 FADD研究进展
• 综述二 神经保护研究进展
• 致谢
• 附录
• 博士期间发表的论文目录